一种含有贝莱斯芽孢杆菌TCS001和井冈霉素的杀菌组合物及其应用

本发明涉及植物保护领域，尤其涉及一种含有贝莱斯芽孢杆菌tcs001和井冈霉素的杀菌组合物，特别是涉及应用于油茶炭疽病有效防治以实现油茶自身免疫性能提高。

背景技术：

1、油茶炭疽病是目前油茶生产中的重要病害。我国各油茶种植区都有发生，特别是在4-10月，一般每年4月初开始发病，5月中旬至6月病菌侵染果实。一年中，先为害嫩梢、嫩叶，后果实，其次为花芽、叶芽，直至初冬的花，危害油茶花叶、花芽、油茶果等多个部位。对油茶出油率和品质有很大的影响。目前防治油茶炭疽病普遍采用化学药剂，存在着农药残留的风险，特别是近年来产生一定抗药性，使一般年份减产在30％左右，流行年份减产可达50％以上，因此亟需开发一种高效低毒的农药。

2、贝莱斯芽孢杆菌(bacillusvelezensis)是一种新型生防细菌，最早于2005年，西班牙学者ruiz-garcía等分离得到2个菌株cr-14b和cr-502t，它们能合成大量的脂肽类物质并具有强的抑菌活性。贝莱斯芽孢杆菌分布广泛，可在干旱、盐渍等逆境下存活，相关产品甚少，开发前景广阔。

3、贝莱斯芽孢杆菌tcs001(bacillusvelezensistcs001)分离自渤海淤泥，原始菌株为海洋芽孢杆菌(bacillussp.)ct2628，经诱变稳定后鉴定并命名为贝莱斯芽孢杆菌tcs001(bacillus velezensistcs001)，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(cgmcc)，保藏编号为cgmccno.8921，首次公布于专利zl201410168402.2。在na培养基上生长后，tcs001单菌落形态呈近圆形，浅黄色，不透明；培养初期菌落表面光滑，边缘整齐，后期表面有褶皱，边缘略不整齐，中间有凸起，四周呈云雾状扩散。经革兰氏染色表明：贝莱斯芽孢杆菌tcs001菌株为革兰氏阳性，杆状；对黄瓜灰霉病菌、黄瓜蔓枯病菌、黄瓜菌核病菌、黄瓜褐斑病菌、棉花枯萎病菌及香蕉叶斑病菌均有一定的抑制效果，其中对黄瓜灰霉病菌的抑制率最高，达87.66％。本领域已知，贝莱斯芽孢杆菌种类众多，暂无具体统计数量，但具有诱导植物抗病、抗逆、促生的贝莱斯芽孢杆菌报道较少。

4、井冈霉素是一种放线菌产生的氨基寡糖类抗生素，具有较强的内吸性，易被菌体细胞吸收并在其内迅速传导，具有抑制真菌海藻糖酶活性，使海藻糖不能分解成葡萄糖。且抑制肌醇的生物合成来影响磷脂的产生。除此之外，井冈霉素还抑制致病真菌的纤维素降解酶和多聚半乳糖醛酸酶的活性，从而降低致病真菌的致病力。井冈霉素广泛应用于水稻、小麦等作物防治纹枯病等已有五十多年历史，且未产生抗药性。虽然已有专利cn201310590636.1公开了多粘类芽孢杆菌和井冈霉素复配组合物防治油茶炭疽病的用途，单剂防效分别达57.14％和64.23％；而两者复配比例(1:5)防效为64.23％；复配比例(1:10)防效为71.42％；复配比例(1:15)防效为71.42％；复配比例(1:20)防效为78.51％，高于对照药剂。同时对控制油茶落果有很好的效果，最低为4.86％，有效的控制产量损失。但近些年来，随着对该药物的不断了解与开发，发现其具有激活植物自身免疫作用，并且对于其防治油茶炭疽病的鲜有报道。

5、经过检索，相关专利cn201810488707.x公开了一种含井冈霉素的杀菌组合物及其应用，含有活性成分井冈霉素与贝莱斯芽孢杆菌，以含1000亿cfu/g的贝莱斯芽孢杆菌设定为100％母药，所述的井冈霉素与贝莱斯芽孢杆菌的重量比为15:1～1:15。但是，其说明书中仅记载了“贝莱斯芽孢杆菌，是从海洋中获得的生防细菌。贝莱斯芽孢杆菌不仅能有效抑制病原菌的生长，并且能够产生刺激植物生长和诱导植物防御反应的化合物，能改善土壤根系的微环境，增强植物的长势和抗病能力，提高作物产量和收益。”该专利并没有公开贝莱斯芽孢杆菌的具体种类及其来源。首先，该专利可能涉及公开不充分的问题，因为本领域技术人员并不知道其具体使用的菌株种类及其来源，可能无法重复实施该技术方案。其次，本技术发明人推测该专利所使用菌株可能同为贝莱斯芽孢杆菌属，因为其体现出该属所具有的生物防治能力，但肯定与本技术所使用的贝莱斯芽孢杆菌tcs001为不同菌株，本技术发明人从未将贝莱斯芽孢杆菌tcs001提供给他人，而且本技术中所使用的贝莱斯芽孢杆菌tcs001菌株产生的抗病激活能力不仅局限于菌株本身，还包括菌株制备的发酵液、发酵滤液及其次生代谢产物。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题是提供一种对油茶炭疽病具有协同增效作用的杀菌组合物，该杀菌组合物能够协同激活油茶对炭疽病的免疫能力，提高油茶对炭疽病的免疫激活能力。

2、本发明提供的一个技术方案为一种杀菌组合物，含有活性成分井冈霉素和贝莱斯芽孢杆菌tcs001和井冈霉素，所述贝莱斯芽孢杆菌tcs001为从海洋生境获得海洋芽孢杆菌(bacillus sp.)ct2628菌株，其保藏编号为：cgmcc no.8921，以40亿cfu/毫升贝莱斯芽孢杆菌tcs001质量为100％计，其中贝莱斯芽孢杆菌tcs001和井冈霉素的质量比为100:1-2:1；优选的，贝莱斯芽孢杆菌tcs001和井冈霉素的质量比为40:1-60:1、2:1；尤其优选的，贝莱斯芽孢杆菌tcs001和井冈霉素的质量比为2:1。

3、优选，所述贝莱斯芽孢杆菌tcs001和井冈霉素的总质量占杀菌组合物的质量百分比为1-50％；优选的，贝莱斯芽孢杆菌tcs001和井冈霉素的总质量占杀菌组合物的质量百分比为5-30％；尤其优选的，贝莱斯芽孢杆菌tcs001和井冈霉素的总质量占杀菌组合物的质量百分比为10-20％。

4、优选，所述杀菌组合物可配制成农业上允许的任意剂型；优选的，所述杀菌组合物的剂型为悬浮剂、种衣剂、可湿性粉剂、水分散粒剂、微囊悬浮剂、包衣颗粒剂、颗粒剂、水溶性粒剂、水溶性粉剂、水剂、乳油、微乳剂、悬乳剂、水乳剂等。

5、优选，所述杀菌组合物还包含一种或多种其它活性成分，优选的，其它活性成分包括杀虫剂、杀菌剂、除草剂、植物生长调节剂、植物免疫剂等。

6、本发明提供的另一个技术方案为一种杀菌组合物，含有活性成分贝莱斯芽孢杆菌tcs001发酵滤液和井冈霉素，所述贝莱斯芽孢杆菌tcs001为从海洋生境获得海洋芽孢杆菌(bacillus sp.)ct2628菌株，其保藏编号为：cgmcc no.8921；所述莱斯芽孢杆菌tcs001发酵滤液的制备方法为将贝莱斯芽孢杆菌tcs001发酵液在无菌条件下离心取发酵上清液，使用滤膜过滤制得；

7、优选，将贝莱斯芽孢杆菌tcs001发酵液在无菌、4℃、7830rpm条件下进行离心30min，离心完成后取发酵上清液用0.22μm滤膜过滤3次，制成贝莱斯芽孢杆菌tcs001发酵滤液备用；

8、优选，所述莱斯芽孢杆菌tcs001发酵滤液的浓度为贝莱斯芽孢杆菌tcs001发酵滤液/水体积比为1：5—1:80，优选的，体积比为1：5；

9、优选，所述井冈霉素的浓度为12.5—200mg/l，优选的12.5mg/l；

10、优选，所述莱斯芽孢杆菌tcs001发酵滤液与井冈霉素溶液的质量比1：100—100:1；优选的，1:10—10:1；优选的，1:1。

11、本发明提供的另一个技术方案为所述的杀菌组合物用于防治植物病菌的用途，优选的，所述植物包括谷类、水果、蔬菜、经济作物，所述病菌包括根肿菌纲、卵菌纲、壶菌纲、接和菌纲、子囊菌纲、担子菌纲、半知菌纲等宽范围植物病性真菌，尤其优选的，所述植物病原菌为油茶炭疽病菌。

12、本发明提供的另一个技术方案为一种防治植物致病菌的方法，将杀菌组合物作用于致病菌和/或其环境，或者植物、植物部位、种子、土壤、区域、材料或空间中。

13、优选，所述贝莱斯芽孢杆菌tcs001和井冈霉素同时施用、或分别施用、或相继施用。

14、本发明提供的另一个技术方案为所述的杀菌组合物用于提高油茶抗病性能和/或免疫功能的用途。

15、优选，所述提高油茶抗病性能和/或免疫功能包括改善油茶叶片中丙二醛(mda)、超氧自由基(o-)；防御酶系：过氧化氢酶(cat)、抗坏血酸过氧化物酶(apx)、超氧化物歧化酶(sod)、过氧化物酶(pod)、苯丙氨酸裂解酶(pal)、多酚氧化酶(ppo)；病程蛋白：β-1,3-葡聚糖酶酶活(glu)、几丁质酶活(chi)含量中的一种或几种。

16、优选，所述抗病为抗油茶炭疽病。

17、本发明提供一种具有协同增效作用的激活油茶对炭疽病免疫功能的组合物，含有40亿cfu/毫升贝莱斯芽孢杆菌tcs001悬浮剂和8％井冈霉素水剂。

18、优选的，所述40亿cfu/毫升贝莱斯芽孢杆菌tcs001悬浮剂：8％井冈霉素水剂的质量比为2:1；

19、优选的，所述40亿cfu/毫升贝莱斯芽孢杆菌tcs001悬浮剂配方包括贝莱斯芽孢杆菌tcs001发酵液40％、分散剂sxc 3％、分散剂una 3％、增稠剂黄原胶0.15％、防腐剂卡松0.2％、防腐剂苯甲酸钠0.2％、水53.45％。

20、本发明有益的技术效果

21、本发明通过将贝莱斯芽孢杆菌tcs001和井冈霉素进行二元复配，在一定的质量比例范围内得到的杀菌混合物，在防治油茶炭疽病效果上具有协同增效的作用。

22、本发明提供的杀菌混合物为油茶炭疽病的防治提供了新型备选药剂。

23、本发明的杀菌组合物同时利用生物菌剂的抗病功能，以及井冈霉素的免疫激活功能，从植物体的内外两方面提高了抗病的防效，而且可通过复配的方式，达到既减少施药量又能够增效的生态模式。

24、由于井冈霉素作为油茶抗病激活剂单独施用抑菌效果较差，但凭借其独特的抑菌机制与激活植物自身免疫的功能，结合贝莱斯芽孢杆菌tcs001作为生物农药的抑菌及抗病诱导作用，可以显著提高油茶对炭疽病免疫效果与抗病性能。因此，井冈霉素与贝莱斯芽孢杆菌tcs001混配，可以提高防治药剂的抑菌能力，同时激活植物自身免疫功能。能够减少化学农药施用量，并发挥该贝莱斯芽孢杆菌抗病诱导功能以提高总体防效。

25、本发明的杀菌组合物施用到油茶后，发现能够通过调节油茶的丙二醛(mda)、超氧自由基(o-)、过氧化氢酶(cat)、抗坏血酸过氧化物酶(apx)、超氧化物歧化酶(sod)、过氧化物酶(pod)、苯丙氨酸裂解酶(pal)、多酚氧化酶(ppo)、β-1,3-葡聚糖酶酶活(glu)、几丁质酶活(chi)在体内的含量来激活油茶对炭疽病的免疫功能。