一种用于真菌Oidiodendrontruncatum生产新型抗肿瘤活性化合物chetracinB的新型...的制作方法
[0027]实施例2
[0028]2.1培养基的配置
[0029]称取麦芽糖2g，蛋白胨0.5g，玉米粉10g，谷氨酸钠0.5g，葡萄糖10g，酵母膏4g，硫酸镁0.lg，磷酸二氢钾3g，溶于去离子水，定容至1000ml。
[0030]2.2 发酵生产 chetracin B
[0031]同实施例1的步骤1.2。
[0032]2.3chetracin B 产量的测定
[0033]同实施例1的步骤1.3，测得chetracin B的产量为32mg/L。
[0034]实施例3
[0035]3.1培养基的配置
[0036]称取麦芽糖10g，蛋白胨5g，玉米粉lg，谷氨酸钠10g，葡萄糖100g，酵母膏0.2g，七水硫酸镁lg，磷酸二氢钾0.lg，溶于去离子水，定容至1000ml。
[0037]3.2 发酵生产 chetracin B
[0038]同实施例1的步骤1.2。
[0039]3.3chetracin B 产量的测定
[0040]同实施例1的步骤1.3，测得chetracin B的产量为26mg/L。
[0041]实施例4
[0042]4.1培养基的配置
[0043]称取麦芽糖4g，蛋白胨3g，玉米粉4g，谷氨酸钠3g，葡萄糖20g，酵母膏lg，七水硫酸镁0.5g，磷酸二氢钾0.5g，溶于去离子水，定容至1000ml。
[0044]4.2 发酵生产 chetracin B
[0045]同实施例1的步骤1.2。
[0046]4.3chetracin B 产量的测定
[0047]同实施例1的步骤1.3，测得chetracin B的产量为45mg/L。
[0048]对比例I
[0049]除培养基采用常用培养基(山梨醇2.0%，酵母膏0.3%，味精1.0%色氨酸
0.05%, KH2PO40.05%，麦芽糖 2.0%, MgSO4.7Η200.03% )(参考文献 -Liyuan Li，DehaiLi，Yepeng Luan, Qianqun Gu, and Tianjiao Zhu.Cytotoxic Metabolites from theAntarctic Psychrophilic Fungus Oid1dendron truncatum[J].J.Nat.Prod.2012,75,920-927)外，其余发酵生产chetracin B及产量测定条件方法同实施例1的步骤1.2和
1.3，测得 chetracin B 含量为 5.6mg/L。
[0050]综上所述，本发明的新型培养基原料易得，成本低，制备方法简单，能显著促进南极来源真菌GW3-13发酵生产chetracin B，有利于大规模工业化生产，对真菌GW3-13发酵研宄及chetracin B医药学研宄具有重大意义。
[0051]在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
【主权项】
1.一种用于真菌Oid1dendron truncatum生产新型抗肿瘤活性化合物chetracin B的新型培养基，其特征在于，每升所述新型培养基包括:麦芽糖2?10g，蛋白胨0.5?5g，玉米粉I?10g，谷氨酸钠0.5?10g，葡萄糖10?100g，酵母膏0.2?4g，七水硫酸镁0.1?lg，磷酸二氢钾0.1?3g，其余为去离子水去。
2.根据权利要求1所述的新型培养基，其特征在于，所述麦芽糖5g，蛋白胨1.5g，玉米粉3g，谷氨酸钠4g，葡萄糖23.1g,酵母膏1.78g，七水硫酸镁0.45g，磷酸二氢钾0.5g，溶于去离子水，定容至1000ml。
3.一种用于制备根据权利要求1所述的新型培养基的方法，其特征在于，其步骤:所述麦芽糖，所述蛋白胨，所述玉米粉，所述谷氨酸钠，所述葡萄糖，所述酵母膏，所述七水硫酸镁，所述磷酸二氢钾溶于去离子水，最后定容。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，权利要求3所述步骤进一步包括:在121。。，灭菌 20 ?30min。
5.一种是用根据权利要求1所述的新型培养基培养南极来源真菌Oid1dendrontruncatum GW3-13生产chetracin B的发酵方法，其特征在于，包括步骤:取南极来源真菌Oid1dendron truncatum GW3-13孢子接种所述新型培养基进行培养，进行发酵培养10?12天，获得发酵液。
6.根据权利要求5所述的发酵方法，其特征在于，按终浓度3.3X 10 6个所述南极来源真菌 Oid1dendron truncatum GW3-13 抱子/ml 进行接种；所述培养是在 18_25°C，180r/min摇床培养。
7.一种根据权利要求6所述的发酵方法生产的chetracin B的检测方法，其特征在于，包括步骤:待所述发酵液变深灰黑色后约12h，停止培养；取适量所述发酵液，加入乙酸乙酯和玻璃珠萃取离心，取适量有机相进行减压旋转蒸馏，馏干物用乙酸乙酯溶解，离心；取适量上层液，用HPLC测定chetracin B含量，然后换算所述发酵液中chetracin B含量。
8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述发酵液取20ml，所述乙酸乙酯40ml，所述玻璃珠5粒；所述萃取在25°C和150r/min条件下进行。
【专利摘要】本发明提供了一种用于真菌Oidiodendron truncatum生产新型抗肿瘤活性化合物chetracin B的新型培养基，每升所述新型培养基包括：麦芽糖2～10g，蛋白胨0.5～5g，玉米粉1～10g，谷氨酸钠0.5～10g，葡萄糖10～100g，酵母膏0.2～4g，七水硫酸镁0.1～1g，磷酸二氢钾0.1～3g，其余为去离子水，且提供了制备方法。本发明的原料易得，成本较低，制备方法简单，能显著促进南极来源真菌GW3-13发酵生产chetracin B的产量，使得chetracin B产量由原始的5.6mg/L提高到54.7mg/L，有利于大规模工业化生产，对真菌GW3-13发酵研究及chetracin B医药学研究具有重大意义。CCTCC M201004320100209
【IPC分类】C12R1-645, C12P17-18
【公开号】CN104630303
【申请号】CN201410313382
【发明人】朱天骄, 顾谦群, 柏帅, 李德海, 车茜
【申请人】中国海洋大学
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2014年7月3日
文档序号 :
【 8313411 】
技术研发人员：朱天骄,顾谦群,柏帅,李德海,车茜
技术所有人：中国海洋大学
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
声 明 ：此信息收集于网络，如果你是此专利的发明人不想本网站收录此信息请联系我们，我们会在第一时间删除
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