人干细胞生长因子脂质体及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明属于药物制剂及化妆品领域，特别涉及一种人干细胞生长因子脂质体及其制备方法与应用。
背景技术：
人干细胞生长因子(humanstem cell growth factor，hSCGF，又名 LSLCL)是一种在骨髓造血微环境中起作用的早期造血刺激因子，具有多种生物学活性，主要分布于脑、肝脏、骨髓、胎盘、睾丸、肾脏等，由这些组织(尤其骨髓)中的基质细胞、成纤维细胞、内皮细胞、卵细胞、足细胞、肝细胞产生。其基因定位于人染色体19ql3. 3，由4个外显子和3个内含子组装成。已知人干细胞生长因子具有两种形式，全长分子hSCGF-α (成熟mRNA完全开放读码框972bp，编码323个氨基酸，表达蛋白大小约为45KDa)和在C端保守的Ca2+依赖糖 i只另Il结构域(calcium dependent carbohydrate recognition domain, CRD)内缺失 78 M 基酸(erythropoietin，Epo)、协同作用对红细胞系有红细胞爆发促进活性的的截短型分子 hSCGF-β (成熟mRNA长73^ρ，编码245个氨基酸)，因此属于C型凝集素(C_type lectin) 超家族成员。研究证实，SCGF在各种组织的损伤修复，伤口的愈合过程中有显著的作用，SCGF 可促进血管生成、创伤愈合。hSCGF-β在维持肥大细胞生理状态下的存活中发挥作用，参与慢性炎症时血管形成、纤维化、白细胞归巢等病理过程；hSCGF-α通过促进肥大细胞增殖与活化，参与各种应急病理反应如超敏反应或急性炎症反应，并促进组织纤维化的形成过程。在皮肤细胞衰老的过程中，SCGF可通过作用于真皮层的成纤维干细胞，使处于休眠、损伤的成纤维干细胞被激活和修复并成熟分化大量的成纤维细胞。SCGF作为一种生物活性蛋白，具有常温稳定性差、易降解、易失活；生物利用度低、半衰期短、代谢迅速等特点，在常规药品制剂和化妆品剂型制备过程中存在剂型单一、 稳定性差、生物利用度低等缺点。将其应用于化妆品中的关键问题是在制备化妆品过程中必须要保持SCGF的活性。
发明内容
本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种人干细胞生长因子脂质体。本发明的另一目的在于提供所述的人干细胞生长因子脂质体的制备方法。本发明的再一目的在于提供所述的人干细胞生长因子脂质体的应用。本发明的目的通过下述技术方案实现一种人干细胞生长因子脂质体，用作透皮药物制剂，包含质量百分比2. 0 4. 0%的人干细胞生长因子、质量百分比8. 0 10. 0%的磷脂、质量百分比2. 5 3. 5%的胆固醇和质量百分比10 25%的保护剂。所述的人干细胞生长因子可以用基因工程发方法制备的重组人干细胞生长因子， 也可以是应用细胞培养液天然分离的人源人干细胞生长因子；
所述的人干细胞生长因子为hSCGF-α或hSCGF-β ；所述的磷脂为天然大豆磷脂、氢化磷脂、双肉豆蔻磷脂酰胆碱(DMPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)、二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二硬脂酸磷脂酰乙醇胺(DSPE)、二棕榈酰磷脂酸(DPPA)或聚乙二醇 2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000)；所述的保护剂优选为抗坏血酸、维生素E、右旋糖苷、蔗糖、乳糖或海藻糖中的至少一种；所述的人干细胞生长因子脂质体的平均粒径为50 500nm ；优选为50 200nm ；所述的人干细胞生长因子脂质体还包含助悬剂，助悬剂为高分子材料，如PVP等；所述的人干细胞生长因子脂质体还包含甘露醇，在制备人干细胞生长因子脂质体冻干品时，甘露醇对人干细胞生长因子的活性提供有效保护；所述的人干细胞生长因子脂质体的制备方法，优选包括以下步骤(1)用有机溶剂将磷脂和胆固醇溶解，在惰性气体的保护下，于冰浴上超声处理， 得到超声脂质体；(2)在步骤(1)得到的超声脂质体中加入有机溶剂，于35 45°C水浴中旋转蒸发，除尽有机溶剂；再加入含有人干细胞生长因子和保护剂的磷酸盐缓冲溶液，在惰性气体保护下超声处理；(3)在步骤( 得到的产物中加入甘露醇，抽真空冷冻干燥，使水分完全升华后用磷酸缓冲盐溶液水化脂质，再加入水充分涡旋搅拌，挤出，得到人干细胞生长因子脂质体；其中，人干细胞生长因子脂质体包含质量百分比2. 0 4. 0%的人干细胞生长因子、质量百分比8. 0 10. 0%的磷脂、质量百分比2. 5 3. 5%的胆固醇和质量百分比10 25%的保护剂。所述的惰性气体优选为氮气；所述的有机溶剂优选为氯仿；步骤(1)中所述的超声处理的条件优选为于100W超声lOmin，每30s超声1次；步骤O)中所述的有机溶剂的体积用量优选为相当于所述的超声脂质体体积的 2 6倍；步骤⑵和(3)中所述的磷酸盐缓冲溶液优选为pH6. 8、10mmol/L的磷酸盐缓冲溶液；步骤⑵中所述的超声处理的条件优选为于IOOW超声lOmin，每30s超声1次；所述的人干细胞生长因子脂质体在化妆品中的应用；所述的化妆品包括护肤类及抗皱类产品、清洁类化妆品、功能性化妆品和美容化妆品；所述的清洁类化妆品包括清洁霜、洗面乳、沐浴液和剃须用品；所述的功能性化妆品包括美白护肤品、抗皱护肤品、保湿护肤品、祛痘护肤品和抗汗护肤品；所述的美容化妆品包括粉底霜、香粉、面膜、唇膏和胭脂。本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果本发明首次将人干细胞生长因子制备为脂质体应用于化妆品中。人干细胞生长因子(SCGF)制备成脂质体，有效地保持人干细胞生长因子活性，可显著提高干细胞生长因子稳定性，促进皮肤对干细胞生长因子的吸收和利用，具有亲和力强、无毒副作用，适用范围广的优点。经过脂质体包裹的人干细胞生长因子的化妆品抗皱性能经过三个月稳定性考察仍然保持良好。将其作为原料，辅以其他的活性物质及辅料，制备成常用的药剂形态发挥 SCGF的药效，从而提高其生物利用度。将其与其他生物活性物质如抗坏血酸等一起，通过相应的制备工艺，制成水剂、霜剂、乳剂等护肤品，达到皮肤损伤的快速修复，皱纹的修复与祛皱等功效。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。实施例1称取Ig干燥大豆磷脂、0. Ig维生素E和0.35g胆固醇置于茄形烧瓶内，用5 20ml无水乙醇溶解，将茄形烧瓶置50°C恒温水浴减压旋转蒸发，抽至无水乙醇挥尽，形成均勻薄膜，加入含有400mg SCGF(hSCGF-a，购自P印rotech公司)、质量体积比蔗糖的磷酸盐缓冲溶液(PH6. 8U0mmol/L) IOml旋转洗膜，最后振摇水化溶液30 60分钟，即得 SCGF磷脂混悬液(为人干细胞生长因子脂质体)。实施例2称取0. 9g干燥大豆磷脂、0. Ig维生素E和0. 3g胆固醇置于茄形烧瓶内，用5 20ml无水乙醇溶解，将茄形烧瓶置50°C恒温水浴减压旋转蒸发，抽至无水乙醇挥尽，形成均勻薄膜，加入含有300mg SCGF(hSCGF-a，购自P印rotech公司)、质量体积比10%蔗糖的磷酸盐缓冲溶液(pH6. 8U0mmol/L) IOml旋转洗膜，水化溶液通过高压均质机(100MPa，5 次)，即得粒径在100 200范围的半透明脂质体胶体溶液(为人干细胞生长因子脂质体)。实施例3精密称取磷脂800mg，胆固醇250mg，置于25ml茄形瓶中，加入氯仿使其溶解并定容至10ml，注入氮气，于冰浴上100W超声lOmin，每间隔30s超声一次，共超声10次，制得超声脂质体。然后加入相当于超声脂质体体积2 6倍的氯仿使之溶解，35 45°C水浴中旋转蒸发，除尽所有的有机溶剂，再加入含有200mg SCGF(hSCGF-a，购自P印rotech公司)、 2. Og右旋糖苷和1. 5g蔗糖的磷酸缓冲盐溶液(pH6. 8U0mmol/L)适量，充入氮气，冰浴下水化12h，间歇超声IOmin (超声功率100W，每间隔30s超声一次)。用0. 22 μ m微孔滤膜超滤后加入质量体积比10%的甘露醇，抽真空冷冻干燥，使水分完全升华后立即用适量磷酸缓冲盐溶液(PH6. 8，10mmol/L)重新水化脂质，用等量递加法加入少量水(开始两次先加1ml， 再相续增加至2ml)，接下来补加水至10ml。每次加水都要充分涡旋搅拌，用孔径200nm的聚碳酸酯膜挤出，收集样品，即得粒径在50nm 200nm范围的脂质体溶液(为人干细胞生长因子脂质体)。效果实施例(I)SCGF脂质体的包封率和稳定性的测试采用超速离心法分离未包封的部分。 将制备完毕的SCGF脂质纳米粒在4°C过夜，倾入Iml离心管中，使用高速冷冻离心机在 40C 15000r/min离心30min。再于温度37°C、相对湿度75%条件下密闭放置，分别取放置 0、1、3、5、10、30、60、90天的样品上清液，用HPLC方法测定。
包封率=(DT-DS)/DT X 100% ；DT——SCGF的投料总量；DS——是离心后上清液检测到的SCGF量。HPLC方法测定条件为C8色谱柱(4mmX 250mm)，流动相A为体积百分比0. 1 % 三氟乙酸(TFA)水溶液，流动相B为含体积百分比0.1% TFA的乙腈溶液；梯度洗脱，0 50min, 100 10% A，0 90% B ；流速 0. 5ml/min。SCGF脂质体的包封率和稳定性的检测结果如表1所示，结果表明经温度37°C、相对湿度75%条件下，SCGF标准品(即原料药)仅能放置10天，实施例1 3制备的人干细胞生长因子脂质体可放置60天甚至更长，可见本发明制备的人干细胞伸张因子脂质体能显著提高药物的稳定性。表1. SCGF脂质体的包封率及物理稳定性(％ )考察结果
权利要求
1.一种人干细胞生长因子脂质体，其特征在于包含质量百分比2. 0 4. 0%的人干细胞生长因子、质量百分比8. 0 10. 0%的磷脂、质量百分比2. 5 3. 5%的胆固醇和质量百分比10 25%的保护剂。
2.根据权利要求1所述的人干细胞生长因子脂质体，其特征在于所述的人干细胞生长因子为基因工程发方法制备的重组人干细胞生长因子或是是应用细胞培养液天然分离的人源人干细胞生长因子。
3.根据权利要求1所述的人干细胞生长因子脂质体，其特征在于所述的人干细胞生长因子为hSCGF- α或hSCGF- β。
4.根据权利要求1所述的人干细胞生长因子脂质体，其特征在于所述的磷脂为天然大豆磷脂、氢化磷脂、双肉豆蔻磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酸磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酸或聚乙二醇2000- 二硬脂酰磷脂酰乙醇胺。
5.根据权利要求1所述的人干细胞生长因子脂质体，其特征在于所述的保护剂为抗坏血酸、维生素Ε、右旋糖苷、蔗糖、乳糖或海藻糖中的至少一种。
6.根据权利要求1所述的人干细胞生长因子脂质体，其特征在于所述的人干细胞生长因子脂质体包含甘露醇。
7.权利要求1 6任一项所述的人干细胞生长因子脂质体的制备方法，其特征在于包括以下步骤(1)用有机溶剂将磷脂和胆固醇溶解，在惰性气体的保护下，于冰浴上超声处理，得到超声脂质体；(2)在步骤(1)得到的超声脂质体中加入有机溶剂，于35 45°C水浴中旋转蒸发，除尽有机溶剂；再加入含有人干细胞生长因子和保护剂的磷酸盐缓冲溶液，在惰性气体保护下超声处理；(3)在步骤( 得到的产物中加入甘露醇，抽真空冷冻干燥，使水分完全升华后用磷酸缓冲盐溶液水化脂质，再加入水充分涡旋搅拌，挤出，得到人干细胞生长因子脂质体；其中，人干细胞生长因子脂质体包含质量百分比2. 0 4. 0%的人干细胞生长因子、质量百分比8. 0 10. 0%的磷脂、质量百分比2. 5 3. 5%的胆固醇和质量百分比10 25% 的保护剂。
8.根据权利要求7所述的人干细胞生长因子脂质体的制备方法，其特征在于所述的惰性气体为氮气；所述的磷酸盐缓冲溶液为PH6. 8、10mmol/L的磷酸盐缓冲溶液；步骤(1)中所述的超声处理的条件为于100W超声lOmin，每30s超声1次；步骤O)中所述的氯仿的体积用量为相当于所述的超声脂质体体积的2 6倍；步骤⑵中所述的超声处理的条件为于IOOW超声lOmin，每30s超声1次。
9.权利要求1 6任一项所述的人干细胞生长因子脂质体在化妆品中的应用，其特征在于所述的化妆品为护肤类及抗皱类产品、清洁类化妆品、功能性化妆品或美容化妆品。
10.根据权利要求9所述的人干细胞生长因子脂质体在化妆品中的应用，其特征在于所述的清洁类化妆品为清洁霜、洗面乳、沐浴液或剃须用品；所述的功能性化妆品为美白护肤品、抗皱护肤品、保湿护肤品、祛痘护肤品或抗汗护肤所述的美容化妆品为粉底霜、香粉、面膜、唇膏或胭脂。
全文摘要
本发明公开了一种人干细胞生长因子脂质体及其制备方法与应用。该人干细胞生长因子脂质体包含2.0～4.0％的人干细胞生长因子、8.0～10.0％的磷脂、2.5～3.5％的胆固醇和10～25％的保护剂。本发明通过将人干细胞生长因子制备成脂质体，有效地保持人干细胞生长因子活性，可显著提高干细胞生长因子稳定性，促进皮肤对干细胞生长因子的吸收和利用，具有亲和力强、无毒副作用，适用范围广的优点。经过脂质体包裹的人干细胞生长因子的化妆品抗皱性能经过三个月稳定性考察仍然保持良好。将其作为原料，辅以其他的活性物质及辅料，制备成常用的药剂形态发挥SCGF的药效，从而提高其生物利用度。
文档编号A61Q1/12GK102512370SQ20111044957
公开日2012年6月27日 申请日期2011年12月28日 优先权日2011年12月28日
发明者任哲, 刘薇, 杨珂, 王一飞, 舒辉萍, 陈海佳 申请人:广州赛莱拉生物科技有限公司
文档序号 :
【 1370468 】
技术研发人员：王一飞,陈海佳,舒辉萍,杨珂,刘薇,任哲
技术所有人：广州赛莱拉生物科技有限公司
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
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技术研发人员：王一飞,陈海佳,舒辉萍,杨珂,刘薇,任哲
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