一种简单实用的乳酸杆菌液体发酵方法
技术领域：
本发明属于发酵工程技术领域，尤其涉及一种乳酸杆菌发酵方法和应用。
背景技术：
乳酸杆菌为乳酸菌类一种，乳酸菌通常泛指能够利用碳水化合物进行发酵后产生大量乳酸的细菌。乳酸菌在自然界和人畜消化系统中广泛存在，其中绝大部分都存在于人体及动物的肠道，是机体必不可少且具有重要生理功能的菌群。常用的益生乳酸菌多为乳酸杆菌类。市面上也不缺乏动物用乳酸杆菌制品。目前，对于乳酸杆菌的培养，多利用固态底物或者半固态底物培养基(例如乳制品、果汁制品等等)，发酵产品直接应用，但是此类方法生产的产品种类单一，成本偏高，应用范围狭窄，不适用于动物用保健品。也有人利用固态物料发酵生产动物饲料产品(专利申请号为:200910040347.8)，其配方确为饲料原料，但是其发酵工艺复杂，操作繁琐，对物料物理状态要求高，而且发酵48h后，菌含量仍然达不到很高。对于乳酸杆菌的液体发酵培养，方法有限，常见的就是利用MRS液体培养基培养，获得液体发酵乳酸杆菌。MRS培养基配方如下:
蛋白將、10.0 g/L
牛肉粉5.0 g/L
酵母粉4.0 g/L
葡萄糖20.0 g/L
吐温 801.0 g/L
磷酸氢二钾2.0 g/L
乙酸納5.0 g/L
祌檬酸三铵 2.0 g/L
硫酸镁0.2 g/L
硫酸锰0.05 g/L。此配方中所用的蛋白胨、牛肉粉、酵母粉等成本高，不适于工业生产。
发明内容
鉴于上述问题，本发明旨在提供一种乳酸杆菌液体发酵方法，能够简化乳酸杆菌的液体发酵，并保证发酵后活菌数与传统发酵培养基一致，使其更好的应用于生产动物用乳Ife杆囷制品。本发明是这样实现的，一种乳酸杆菌发酵方法，包括如下步骤:配制包括如下组分的液体培养基；将菌种种龄为2.5-5亿个/mL的乳酸杆菌按接种量为2.5-7.0% (v/v)接种于所述液体培养基，在PH为6-6.5、通气量为0.06-0.2vvm，温度为30-37°C条件下，发酵培养22-24小时。该培养基组分如下:
葡萄糖40-60g/L
乳糖25-40 g/L
玉米浆20-35 g/L
七水合硫酸镁0.25-0.35 g/L
曰 7jc合疏酸锰0 .01 -0.015 g/L
七水合硫酸铁0.01 -0.015 g/L
乙酸钠16-21 g/L
吐温80lmL。本发明实施例进一步提供上述乳酸杆菌液体发酵方法所制备的乳酸杆菌在动物益生菌保健品中的应用。本发明的优点及效果如下:1、培养基配方原料成本低廉，适合工业化需要；2、液体发酵效果可以与传统培养基相一致；3、工艺简单，适合工业化生产；4、应用范围广泛，适合生产各种动物用乳酸杆菌制品。
具体实施例方式为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例证，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。本发明实施例提供一种乳酸杆菌发酵方法:包括如下步骤:SO1、配制包括如下组分的液体培养基；
S02、将菌种种龄为2.5-5亿个/mL的乳酸杆菌按接种量为2.5-7.0% (v/v)接种于所述液体培养基，在pH为6-6.5、通气量为0.06-0.2vvm，温度为30-37°C条件下，发酵培养22-24小时。该培养基组分如下:
葡萄糖40-60g/L
乳糖25-40 g/L
玉米浆20-35 g/L
七水合硫酸镁0.25-0.35 g/L
四水合石友酸锰0.01-0.015 g/L
七 TjC合疏酸铁0.01 -0.015 g/L
乙酸钠19-21 g/L
吐温80lmL。具体地，步骤S02中所用的乳酸杆菌，可以是植物乳杆菌， 也可以是干酪乳杆菌、嗜酸性乳杆菌中的任意一种。此3种乳酸杆菌，均购自广东省微生物菌种保藏中心。其编号分别为:植物乳杆菌:GIM1.140 = ASl.3 ;嗜酸乳杆菌:GIM1.208 = ASl.2686 ;干酪乳杆菌:GIM1.325 = ATCC7469。具体地，步骤S02中，使用碱性剂调节发酵过程中的PH值，该碱性剂没有限制，例如，氢氧化钠、氨水等。具体地，步骤S02中，菌种种龄为2.5-5亿个/mL，其培养过程为:从MRS固体斜面培养基中挑取菌落，接入30mL MRS液体培养基中，37 °C恒温摇床中培养，转速为200rpm，培养16-18小时。实施例证1、从MRS固体斜面培养基中挑取菌落，接入30mL MRS液体培养基中，37°C恒温摇床中培养，转速为200rpm，培养16-18小时。植物乳杆菌的菌种种龄为4_5亿个/mL。MRS培养基组分如下:蛋白胨、10.0 g/L
牛肉粉5.0 g/L
酵母粉4.0 g/L
葡萄糖20.0 g/L
吐温 801.0 g/L
磷酸氢二钾2.0 g/L 乙酸纳 5.0 g/L
抒檬酸三铵2.0 g/L 硫酸镁 0.2 g/L
硫酸锰0.05 g/L。固体培养基需加入琼脂粉15.0g。将上述成分加人蒸馏水中，加热溶解，校正pH
6.2,分装后121°C高压灭菌15min_20min。2、于20L发酵罐中置入15L所述液体培养基，121°C灭菌30min冷却至32°C后，将菌种种龄为4-5亿个/mL的植物乳杆菌，按接种量为3.3% (v/v)，接种于发酵罐中，在pH为6.4、通气量为0.lwm，温度为37°C条件下，发酵培养24小时。所述液体培养基组分如下:
葡萄糖30g/L
乳糖30 g/L
玉米浆25 g/L
七水合硫酸镁0.3 g/L
四水合硫酸锰0.01 g/L
七水合硫酸铁0.01 g/L
乙酸纳20 g/L
吐温80I mL。3、发酵结果测定:通过血球计数板计数的方法，测定了发酵终点，植物乳杆菌活菌含量:达到1.1 X 10lclcfu/mL。效果与MRS培养基的培养效果相当。
4、上述发酵产物可以直接添加到动物日粮中，也可以制作成固态产品，更可以添加入动物日常饮用水中等等，效果良好，促进动物生产性能。以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范 围。
权利要求
1.一种乳酸杆菌发酵方法，包括如下步骤: 配制包括如下组分的液体培养基； 将菌种种龄为2.5-5亿个/mL的乳酸杆菌按接种量为2.5-7.0% (v/v)接种于所述液体培养基，在pH为6-6.5、通气量为0.06-0.2vvm,温度为30_37°C条件下，发酵培养22-24小时， 所述培养基组分如下: 葡萄糖40-60g/L 乳糖25-40 g/L 玉米浆20-35 g/L七水合疏酸镁0.25-0.35 g/L四水合 疏酸锰0.01-0.015 g/L七水合疏酸铁0.01-0.015 g/L 乙酸钠16-21 g/L 吐温80lmL。
2.如权利要求1所述的乳酸杆菌可以为植物乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸性乳杆菌中任意一种。
3.如权利要求1所述的乳酸杆菌发酵方法，其特征在于，所述液体培养基的组分如下: 葡萄糖30 g/L乳糖30 g/L玉米浆25 g/L七水合硫酸镁0.3 g/L四水合硫酸锰0.01 g/L七水合硫酸铁0.01 g/L乙酸钠20 g/L吐温80I mL。
4.如权利要求1所述的乳酸杆菌发酵方法，其特征在于，所述发酵培养步骤中使用可灭菌的密闭容器作为发酵容器，也可使用发酵罐作为发酵容器，所述发酵容器的装料系数为 0.5-0.75。
5.如权利要求1所述的乳酸杆菌发酵方法，其特征在于，所述发酵培养在静止条件下或接近静止条件(搅拌转速为25-50rpm左右)下进行。
6.如权利要求1所述的乳酸杆菌发酵方法，其特征在于，所述发酵培养在压强为0.03-0.08Mpa条件下进行。
7.如权利要求1-6任一项所述发酵方法所制备的乳酸杆菌发酵液在动物用乳酸杆菌制品，如在动物保 健品、动物词料中的应用。
全文摘要
本发明适用于发酵工程技术领域，提供了一种简单实用的乳酸杆菌发酵方法，包括如下步骤配制包括如下组分的液体培养基；将菌种种龄为2.5-5亿个/mL的乳酸杆菌按接种量为2.5-7.0％(v/v)接种于所述液体培养基，在pH为6-6.5、通气量为0.06-0.2vvm，温度为30-37℃条件下，发酵培养22-24小时。本发明乳酸杆菌发酵方法，通过对发酵培养基优化，实现了发酵菌数与传统培养基一致，配制方法简单，成本明显降低，更加适用于工业化需求。
文档编号C12R1/25GK103194403SQ20121000514
公开日2013年7月10日 申请日期2012年1月9日 优先权日2012年1月9日
发明者张捷, 郑文官, 潘韵, 彭永鹤, 李永新 申请人:深圳市圣西马生物技术有限公司
文档序号 :
【 601788 】
技术研发人员：张捷,郑文官,潘韵,彭永鹤,李永新
技术所有人：深圳市圣西马生物技术有限公司
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
声 明 ：此信息收集于网络，如果你是此专利的发明人不想本网站收录此信息请联系我们，我们会在第一时间删除
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