狗蔷薇的组织培养和育苗方法
技术领域：
本发明涉及一种蔷薇属植物的组织培养和育苗方法，特别是涉及一种狗蔷薇的组织培养和育苗方法。属植物栽培、植物无性繁殖及园艺学技术领域。
背景技术：
狗蔷薇属蔷薇科蔷薇属，是欧洲传统的优良树月季砧木。它茎干直、硬度高、坑风、抗寒性强，适应性广。嫁接月季亲和性好，市场前景广阔。在本发明作出以前，传统狗蔷薇的繁殖方法有种子繁殖、扦插繁殖和叶片离体繁殖三种。种子繁殖休眠时间长，沙藏一年发芽率仅为5％～10％，生产上没有应用价值。扦插繁殖是将狗蔷薇的芽移植嫁接到狗蔷薇的根茎上进行的，芽生根困难，限制了狗蔷薇在树月季生产中的应用。叶片离体繁殖是首先形成愈伤组织，再由愈伤组织分化成苗。此法的缺点是苗难以保持母本优良性状，易发生变异。
发明内容
本发明的目的在于克服上述不足，提供一种繁殖系数高、成活率高、性状不会发生变异的狗蔷薇的组织培养和育苗方法，使狗蔷薇的试管扩繁的月增殖系数达到要求，从而解决狗蔷薇苗木的规模化生产问题，促进树月季的规模化生产。
本发明的目的是这样实现的一种狗蔷薇的组织培养和育苗方法，其特征在于它包括外植体的取材、初代培养、继代培养、生根培养和试管苗的移栽，其具体工艺步骤如下步骤一、外植体的取材4～5月份，从田间剪取狗蔷薇一年生枝条，剪去叶片，切成2～3节茎段，消毒灭菌，再切成单芽的单节茎段，备用，步骤二、初代培养将步骤一得单芽的单节茎段，接种在初代培养基上，进行初代培养，单芽的单节茎段在初代培养基上光照强度1500～2000lux，培养温度23±2℃，培养时间30±5天，这样，单节茎段上的单芽长成芽苗，将芽苗从茎段上切下，备用，步骤三、继代培养将步骤二切下的芽苗，移入装有继代培养基的密闭的容器中，进行继代培养，扩繁试管苗，培养温度23±2℃，光照时间14±2小时/天，培养基PH值5.8～6.0，继代培养时，大于3叶的芽苗切成单芽茎段，小于3叶的芽苗切成单株，以后每30±5天如此继代一次，扩繁试管苗，步骤四、生根培养将步骤三得扩繁试管苗取出，移入装有生根培养基的密闭的容器中，进行生根培养，试管苗在生根培养基中光照强度2500～3000lux，培养温度23±2℃，至30±5天，试管苗在生根培养基中根生长至0.3～0.5cm的3～5条鸡爪状新根，备用，步骤五、试管苗的移栽将步骤四得生根试管苗取出，移栽到基质上培育，保持温度20±2℃，湿度保持在90％以上，时间30～35天，培育成苗木。
本发明狗蔷薇的组织培养和育苗方法，步骤二所述的初代培养基其成份是基本培养基+苄基腺嘌呤0.5～2mg/L+奈乙酸0.01～0.1mg/L+维生素C10～40mg/L+2～4％蔗糖；步骤三所述的继代培养基其成份是基本培养基+苄基腺嘌呤0.2～1.2mg/L+腺嘌呤0.5～1.2mg/L+吲哚丁酸0.05～0.1mg/L+2～4％蔗糖；步骤四所述的生根培养基其成份是1/2基本培养基+吲哚丁酸0.1～0.5mg/L+奈乙酸0.05～0.1mg/L+1.5～3％蔗糖，或1/2基本培养基+吲哚丁酸0.2～0.5mg/L+苄基腺嘌呤0.05～0.2mg/L+1～3％蔗糖；步骤五所述的移栽基质是珍珠岩、蛭石和草炭土的混合基质，三者的体积比为1∶0.8～1.2∶0.8～1.2。
本发明狗蔷薇的组织培养和育苗方法，所述的基本培养基成份是硝酸氨1650mg/L、硝酸钾1900mg/L、二水氯化钙440mg/L、七水硫酸镁370mg/L、磷酸二氢钾170mg/L、碘化钾0.83mg/L、硼酸6.2mg/L、四水硫酸盐22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L、肌醇100mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、甘氨酸2mg/L。
本发明狗蔷薇的组织培养和育苗方法，所述的步骤五将生根后的试管苗取出后先洗去根部培养基，再移栽到珍珠岩、蛭石和草炭土的混合基质上，栽好后用800～1000倍敌克浇透苗和基质，用无纺布覆盖，经常保持无纺布表面湿润，每隔5～7天喷1±0.2％磷酸二氢钾和800倍多菌灵混合液，待移栽苗长出2～3片新叶，逐渐打开无纺布直至最后揭去，经此法炼苗30～35天，狗蔷薇的成活率可达95％以上，以后管理同一般苗木管理。
本发明狗蔷薇的组织培养和育苗方法，步骤一所述消毒灭菌，是先在0.8～1.2％洗衣粉水中振荡洗涤6～8分钟，再在自来水龙头下流水冲洗30±5分钟，用洁净纱布吸干水，放置在70～75％的乙醇溶液中消毒30±5秒，无菌水冲洗3～4次，再转入0.08～0.12％Hgcl2溶液中消毒8～10分钟，最后用无菌水冲洗5～6次，每次4±2分钟，用无菌纱布吸干表面的水分。
用本发明的组织培养方法育狗蔷薇试管苗，解决了原繁殖法繁殖系数低、成活率低的难题，使试管苗月增殖系数达到34左右，仅需一年就可以从一个外植体增殖到60～70万株左右试管苗，这样狗蔷薇的组织培养苗完全可以满足狗蔷薇苗木的规模化生产的要求。且性状不会发生变异。
因此本发明实现了优质树月季砧木狗蔷薇的生产规模化。
具体实施例方式本发明涉及一种狗蔷薇的组织培养和育苗方法，它包括外植体的取材、初代培养、继代培养、生根培养和试管苗的移栽六大工艺步骤，其具体工艺步骤如下步骤一、外植体的取材在4～5月份连续晴天，从田间剪取狗蔷薇一年生半木质化枝条，剪去叶片，切成2～3节茎段，先在0.8～1.2％洗衣粉水中振荡洗涤6～8分钟，再在自来水龙头下流水冲洗30±5分钟，用洁净纱布吸干水，然后再在无菌超净工作台中，放置在7075％的乙醇溶液中消毒30±5秒，无菌水冲洗3～4次，再转入0.08～0.12％Hgcl2溶液中消毒8～10分钟，最后用无菌水冲洗56次，每次4±2分钟，用无菌纱布吸干表面的水分，再切成单芽的单节茎段，备用。
步骤二、初代培养将步骤一得单芽的单节茎段，接种在基本培养基+苄基腺嘌呤0.5～2mg/L+奈乙酸0.01～0.1mg/L+维生素C10～40mg/L+2～4％蔗糖的初代培养基上，进行初代培养，单芽的单节茎段在初代培养基上光照强度1500～2000lux，培养温度23±2℃，培养时间30±5天，这样，单节茎段上的单芽长成芽苗，芽苗高达2cm左右，将芽苗从茎段上切下，备用。
步骤三、继代培养将步骤二切下的芽苗，移入装有继代培养基的密闭的容器中，进行继代培养，扩繁试管苗。继代扩繁所用的继代培养基是基本培养基+苄基腺嘌呤0.2～1.2mg/L+腺嘌呤0.5～1.2mg/L+吲哚丁酸0.05～～0.1mg/L+2～4％蔗糖。芽苗在继代培养上的培养温度23±2℃，光照时间14±2小时/天，培养基PH值5.8～6.0，继代培养时，大于3叶的芽苗切成单芽茎段，小于3叶的芽苗切成单株，以后每30±5天如此继代一次。
步骤四、生根培养待扩繁的试管苗增殖到一定数量以后，选取有一定高度的试管苗，移入装有生根培养基的密闭的容器中，进行生根培养，生根培养基其成份是1/2基本培养基+吲哚丁酸0.1～0.5mg/L+奈乙酸0.05～0.1mg/L+1.5～3％蔗糖，或1/2基本培养基+吲哚丁酸0.2～0.5mg/L+苄基腺嘌呤0.050.2mg/L+1～3％蔗糖。试管苗在生根培养基中光照强度2500～3000lux，培养温度23±2℃，10天后小苗根部出现根原基突起，至30±5天，试管苗在生根培养基中根生长至0.3～0.5cm的3～5条鸡爪状白色新根时，进行试管苗移栽。
步骤五、试管苗的移栽将步骤四得生根试管苗取出，洗去根部培养基，移栽到基质上培育，移栽基质是珍珠岩、蛭石和草炭土的混合基质，三者的体积比为1∶0.8～1.2∶0.8～1.2。栽好后用800～1000倍敌克浇透苗和基质，用无纺布覆盖，经常保持无纺布表面湿润，使温度保持在20～±-2℃，湿度保持在90％以上，每隔5～7天喷1±0.2％磷酸二氢钾和800倍多菌灵混合液。待移栽苗长出2～3片新叶，逐渐打开无纺布直至最后揭去，经此法炼苗30～35天，狗蔷薇成活率可高达95％以上，以后管理同一般苗木管理相同。
所述的基本培养基成份是硝酸氨1650mg/L、硝酸钾1900mg/L、二水氯化钙440mg/L、七水硫酸镁370mg/L、磷酸二氢钾170mg/L、碘化钾0.83mg/L、硼酸6.2mg/L、四水硫酸盐22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L、肌醇100mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、甘氨酸2mg/L。
权利要求
1.一种狗蔷薇的组织培养和育苗方法，其特征在于它包括外植体的取材、初代培养、继代培养、生根培养和试管苗的移栽，其具体工艺步骤如下步骤一、外植体的取材 4～5月份，从田间剪取狗蔷薇一年生枝条，剪去叶片，切成2～3节茎段，消毒灭菌，再切成单芽的单节茎段，备用，步骤二、初代培养 将步骤一得单芽的单节茎段，接种在初代培养基上，进行初代培养，单芽的单节茎段在初代培养基上光照强度1500～2000lux，培养温度23±2℃，培养时间30±5天，这样，单节茎段上的单芽长成芽苗，将芽苗从茎段上切下，备用，步骤三、继代培养 将步骤二切下的芽苗，移入装有继代培养基的密闭的容器中，进行继代培养，扩繁试管苗，培养温度23±2℃，光照时间14±2小时/天，培养基PH值5.8～6.0，继代培养时，大于3叶的芽苗切成单芽茎段，小于3叶的芽苗切成单株，以后每30±5天如此继代一次，扩繁试管苗，步骤四、生根培养 将步骤三得扩繁试管苗取出，移入装有生根培养基的密闭的容器中，进行生根培养，试管苗在生根培养基中光照强度2500～3000lux，培养温度23±2℃，至30±5天，试管苗在生根培养基中根生长至0.3～0.5cm的3～5条鸡爪状新根，备用，步骤五、试管苗的移栽 将步骤四得生根试管苗取出，移栽到基质上培育，保持温度20±2℃，湿度保持在90％以上，时间30～35天，培育成苗木。
2.根据权利要求1所述的一种狗蔷薇的组织培养和育苗方法，其特征在于步骤二所述的初代培养基其成份是基本培养基+苄基腺嘌呤0.5～2mg/L+奈乙酸0.01～0.1mg/L+维生素C10～40mg/L+2～4％蔗糖；步骤三所述的继代培养基其成份是基本培养基+苄基腺嘌呤0.2～1.2mg/L+腺嘌呤0.5～1.2mg/L+吲哚丁酸0.05～0.1mg/L+2～4％蔗糖；步骤四所述的生根培养基其成份是1/2基本培养基+吲哚丁酸0.1～0.5mg/L+奈乙酸0.05～0.1mg/L+1.5～3％蔗糖，或1/2基本培养基+吲哚丁酸0.2～0.5mg/L+苄基腺嘌呤0.05～0.2mg/L+1～3％蔗糖；步骤五所述的移栽基质是珍珠岩、蛭石和草炭土的混合基质，三者的体积比为1∶0.8～1.2∶0.8～1.2。
3.根据权利要求2所述的一种狗蔷薇的组织培养和育苗方法，其特征在于所述的基本培养基成份是硝酸氨1650mg/L、硝酸钾1900mg/L、二水氯化钙440mg/L、七水硫酸镁370mg/L、磷酸二氢钾170mg/L、碘化钾0.83mg/L、硼酸6.2mg/L、四水硫酸盐22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L、肌醇100mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、甘氨酸2mg/L。
4.根据权利要求1或2、3所述的一种狗蔷薇的组织培养和育苗方法，其特征在于所述的步骤五将生根后的试管苗取出后先洗去根部培养基，再移栽到珍珠岩、蛭石和草炭土的混合基质上，栽好后用800～1000倍敌克浇透苗和基质，用无纺布覆盖，经常保持无纺布表面湿润，每隔5～7天喷1±0.2％磷酸二氢钾和800倍多菌灵混合液，待移栽苗长出2～3片新叶，逐渐打开无纺布直至最后揭去，经此法炼苗30～35天，以后管理同一般苗木管理。
5.根据权利要求1或2、3所述的一种狗蔷薇的组织培养和育苗方法，其特征在于步骤一所述消毒灭菌，是先在0.8～1.2％洗衣粉水中振荡洗涤6～8分钟，再在自来水龙头下流水冲洗30±5分钟，用洁净纱布吸干水，然后再在无菌超净工作台中，放置在70～75％的乙醇溶液中消毒30±5秒，无菌水冲洗3～4次，再转入0.08～0.12％Hgcl2溶液中消毒8～10分钟，最后用无菌水冲洗5～6次，每次4±2分钟，用无菌纱布吸干表面的水分。
全文摘要
本发明涉及一种狗蔷薇的组织培养和育苗方法，属植物栽培、植物无性繁殖及园艺学技术领域。其具体工艺步骤为从田间剪取狗蔷薇一年生枝条，剪去叶片，切成2～3节茎段，再切成单芽的单节茎段，接种在初代培养基上，单节茎段上的单芽长成芽苗，将芽苗从茎段上切下，移入装有继代培养基的密闭的容器中，进行继代培养，扩繁试管苗，继代培养时，大于3叶的芽苗切成单芽茎段，小于3叶的芽苗切成单株，以后每30±5天如此继代一次，再将扩繁试管苗取出，移入装有生根培养基的密闭的容器中，进行生根培养，最后移栽到基质上，培育成苗木。本发明繁殖系数高、成活率高、且狗蔷薇性状不会发生变异，从而解决狗蔷薇苗木的规模化生产问题，促进树月季的规模化生产。
文档编号C12N5/04GK1799338SQ200510022590
公开日2006年7月12日 申请日期2005年12月16日 优先权日2005年12月16日
发明者吴有光, 曹亮, 顾海燕 申请人:江苏阳光生态农林开发股份有限公司
文档序号 :
【 552485 】
技术研发人员：吴有光,曹亮,顾海燕
技术所有人：江苏阳光生态农林开发股份有限公司
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
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