从菊米中分离纯化总黄酮的方法

2024-12-18 205次浏览

专利名称：从菊米中分离纯化总黄酮的方法
技术领域：
本发明属于天然产物分离纯化领域，涉及天然产物中有效物质的分离纯化工艺，具体为从菊米中分离纯化总黄酮的方法。
技术背景菊米是以野菊花的花蕾为原料,经杀青烘干制成的，黄酮类化合物是野菊花的主要有效成分之一 (菊米初提物总黄酮含量可达13%)。目前对菊米的研究还停留在栽培技术以及药理效用层面，对菊米中药用成分的分离纯化还未见报道。目前，国内在天然产物总黄酮纯化方面，多采用传统的大孔吸附树脂(AB-8， D101等)，传统吸附树脂由于在合成时仅采用疏水交联剂，使得交联剂单一而不能在增加吸附树脂亲水性的同时增加吸附树脂的交联度，从而使树脂的孔结构均匀性差，对菊米中黄酮的吸附量和选择性较差。传统树脂通过对提取液进行一次吸附脱附，完成总黄酮的纯化。传统大孔吸附树脂对黄酮的吸附容量小(50mg/g-80mg/g)，解吸率低(70%-80%)，纯化效果差(最终产品总黄酮含量40%左右)。发明内容本发明的目的在于针对从菊米中提取的总黄酮对吸附分离材料的基本要求，提供一种适用于总黄酮分离纯化专用的大孔吸附树脂及从菊米中分离纯化总黄酮的方法。本发明从高分子分子设计原理出发，采用高分子悬浮聚合工艺，通过加入一定的第三单体和具亲水性能的第二交联剂，达到改善树脂孔结构均匀性、按照分离目标物菊米中黄酮的极性要求赋予树脂适当极性内表面、同时提高树脂对分离目标物的吸附容量和选择性的目的。本发明提供从菊米中分离纯化总黄酮的方法，其特征在于采用总黄酮分离纯化专用大孔吸附树脂动态吸附菊米中总黄酮，吸附饱和以后，采用动态解吸和蒸馏分离纯化提纯总黄酮；然后对一次纯化后的样品液采用同样的方式进行二次纯化；所述菊米提取液总黄酮浓度在3.0 4.0mg/ml范围；所述动态吸附的条件是选用专用大孔吸附树脂，吸附柱内树脂床的高度与直径之比在5~13范围，调节提取液pH为5.0~6.0，控制室温《35t:，控制菊米黄酮提取液流速为每小时1 2BV;所述动态解吸和蒸馏分离用70%乙醇进行脱附，将脱附液蒸馏，除去乙醇后获总黄酮。以上方案概述如下采用总黄酮分离纯化专用大孔吸附树脂，动态吸附从菊米中提取的总黄酮，吸附饱和以后，采用动态解吸并进行蒸馏分离提纯；所述动态吸附的条件为吸附柱内树脂床的高度与直径之比在5~13范围，菊米粗提液总黄酮浓度在3.0 4.0mg/ml范围，控制室温条件《35'C，控制流速为每小时1~2BV，通过70°/。乙醇进行脱附,将脱附液进行蒸馏，回收乙醇，从而分离纯化总黄酮。采用菊米黄酮提取液流速为每小吋1~2BV 进行吸附操作，吸附分离纯化总黄酮，当检测流出液总黄酮浓度达到原液浓度时停止吸附，采用70%乙醇脱附并进行蒸馏分离回收。本发明专用大孔吸附树脂对菊米中总黄酮的高吸附容量和高选择性，使其对菊米粗提液中的总黄酮进行高效吸附，通过对已吸附的树脂进行乙醇脱附和蒸馏分离回收，从而达到提高菊米中总黄酮分离纯化效果的目的。本发明总黄酮分离纯化专用大孔吸附树脂合成反应的配方以重量计为St10—15份DVB30~40份2~4种功能单体5 10 份偶氮引发剂0.5 2.0份致孔剂100~150 份分散剂5 20 份蒸馏水500~1000份无机盐5 — 10份。本发明的总黄酮纯化专用的大孔吸附树脂，是采用2~3种特殊功能单体和交联剂在偶氮引发剂、致孔剂、分散剂、水和无机盐存在条件下，采用悬浮聚合工艺进行高分子共聚合反应所合成；制备步骤如下1、按上述大孔吸附树脂合成反应配方的重量份，准确称取二乙烯基苯(DVB);苯乙烯(St);2~4功能单体；致孔剂以及偶氮引发剂等配制成油相，并搅拌0.5小时；2、按上述配方的重量份将蒸馏水、分散剂及无机盐配制成水相并升温至60—65。C;3、在搅拌下将预先配置好的油相缓慢加入盛有水相的反应器内；4、调整反应器的搅拌速度，使油相分散成珠体后，将反应器的反应温度升高到70—75'C，并保持该温度到珠体定型；5、将反应温度升高到80—85。C，保温5小时，85—90。C，保温5小时；6、将反应器温度降至30—40'C，滤出珠体，水洗；7、将水洗后的珠体转移至蒸馏器内蒸去珠体内的致孔剂，干燥、筛分；8、用酒精洗涤珠体内的低分子聚合物及残存的小分子物质，获得大孔吸附树脂。本发明大孔吸附树脂合成反应配方中，功能单体采用甲基丙烯酸烯丙脂(AMA)和甲基丙烯酸烯二甲氨乙脂(DMAEMA) 2种；偶氮引发剂采用偶氮二异丁腈(AIBN)，致孔剂甲苯(PhMe)和200弁汽油。本发明专用大孔吸附树脂使用以后的解吸再生，依次采用95%乙醇、0.4mol/L的 HC1和0.4mol/L的NaOH，进行缓慢淋洗吸附柱，除去难于脱附的杂质，再用蒸馏水淋洗，去除NaOH，树脂的吸附能力恢复。与传统树脂相比较，本发明所合成的树脂具有总黄酮吸附容量大(90 100mg/g)、二次纯化制得的产品纯度高(》85%)等诸多特点，使得能够很好的开发和利用菊米这一资源。同传统树脂分离纯化总黄酮相比较，本发明具有如下优点1、采用高分子悬浮聚合工艺技术，通过添加亲水性交联剂(AMA)和特定的功能单体(DMAEMA) —步即可合成对菊米中黄酮具有高吸附容量、高选择性的黄酮分离纯化专用大孔吸附树脂。2、通过二次纯化工艺，使得产品中总黄酮含量超过85%，与传统树脂单次纯化相比较，能很好的提高菊米中总黄酮的分离纯化效果。3、所合成的树脂吸附菊米中总黄酮后，容易解吸再生，解吸剂可通过蒸馏回收并多次重复使用，节省资源的利用。
具体实施方式
实施例1合成菊米分离纯化专用吸附树脂的合成在2000ml三口瓶中依次加入蒸馏水1000ml、明胶10ml、氯化钠200g等，当分散剂、无机盐完全溶解后将反应器内部温度升至65—7(TC;将由二乙烯基苯(DVB) 75g、苯乙烯(St) 10g、甲基丙烯酸烯丙脂(AMA) 10g、甲基丙烯酸烯二甲氨乙脂(DMAEMA) 5g、致孔剂甲苯(PhMe) 110g、 200弁汽油40g以及引发剂偶氮二异丁腈(AIBN) 2g等配制成的油相252g 缓慢加入到反应器内。控制搅拌强度使单体液滴粒径在0,2-1.0mm范围，将反应器的反应温度升高到70—75'C，并保持该温度到珠体定型；将反应温度升高到80—85X:保温5小时，85— 90'C保温5小时；将反应器温度降至30—40'C，滤出珠体，大量水洗；将水洗后的珠体转移至蒸馏器内蒸去珠体内的致孔剂，干燥、筛分；用酒精洗涤珠体内的低分子聚合物及残存的小分子物质即得专用大孔吸附树脂。实施例2吸附在*55X800mm的玻璃吸附柱内装填700ml专用大孔吸附树脂，吸附柱内树脂床的高度与直径之比在5~13范围，调节浓度为3.5mg/ml的菊米提取原液自上而下地流过吸附柱，室温条件《35'C，测得所控流速为每小时1 2BV，定时取样分析总黄酮浓度，直至达到原液浓度时，即停止吸附实施例3吸附在cb55X800mm的玻璃吸附柱内装填700ml专用大孔吸附树脂，吸附柱内树脂床的高度与直径之比在5~13范围，经过滤后的第一次纯化液调总黄酮浓度至3.5mg/mL 后自上而下地流过吸附柱，按树脂床体积计控制废水流速为每小时1~2BV，定时取样分析，直至总黄铜浓度达到上样液的浓度。实施例4脱附与蒸馏在小55 X 800mm玻璃吸附柱内装填经总黄酮饱和吸附的专用大孔吸附树脂 700ml，让柱内残留的提取液自然流尽，将吸附液进行脱附。从柱下缓慢通入70%乙醇，严格控制乙醇流速为每小时1BV，直至检测出流出液中总黄酮浓度趋向于零时，即停止脱附操作。将流出液用于蒸馏，冷凝回收乙醇(可重新用于洗脱)，蒸馏后所得为高浓度的总黄酮，两柱共处理树脂对菊米中总黄酮的含量>85%
权利要求
1、一种从菊米中分离纯化总黄酮的方法，其特征在于采用总黄酮分离纯化专用大孔吸附树脂动态吸附菊米中总黄酮，吸附饱和以后，采用动态解吸和蒸馏分离纯化提纯总黄酮；然后对一次纯化后的样品液采用同样的方式进行二次纯化；所述菊米提取液总黄酮浓度在3.0～4.0mg/ml范围；所述动态吸附的条件是选用专用改性大孔吸附树脂，吸附柱内树脂床的高度与直径之比在5～13范围，调节提取液pH为5.0～6.0，控制室温≤35℃，控制菊米黄酮提取液流速为每小时1～2BV；所述动态解吸和蒸馏分离用70％乙醇进行脱附，将脱附液蒸馏，除去乙醇后获总黄酮。
2、根据权利要求1从菊米中分离纯化总黄酮的方法，其特征在于所述总黄酮分离纯化专用大孔吸附树脂合成反应的配方以重量计为二乙烯基苯10~15份苯乙烯30~40份2~4种功能单体5~10份偶氮引发剂0.5~2.0份致孔剂濯~150份分散剂5~20份蒸馏水500 1000份无机盐5~10份。
3、根据权利要求2从菊米中分离纯化总黄酮的方法，其特征在于所述专用大孔吸附树脂采用悬浮聚合工艺进行高分子共聚合反应制备，反应歩骤如下(1) 在大孔吸附树脂合成反应的配方中功能单体采用甲基丙烯酸烯丙脂和甲基丙烯酸烯二甲氨乙脂，偶氮引发剂釆用偶氮二异丁腈，致孔剂采用甲苯和200#汽油，引发剂采用偶氮二异丁腈，分散剂采用明胶和无机盐采用氯化钠；按配方重量份，准确称取二乙烯基苯，苯乙烯，甲基丙烯酸烯丙脂和甲基丙烯酸烯二甲氨乙脂，偶氮二异丁腈，甲苯和200 #汽油，配制成油相并搅拌0.5小时；(2) 根据配方将蒸馏水，明胶和氯化钠配制成水相并升温至60—65。C;(3) 在搅拌下将预先配置好的油相缓慢加入盛有水相的反应器内；(4) 调整反应器的搅拌速度，使油相分散成珠体后，将反应器的反应温度升高到70—75'C，并保持该温度到珠体定型；(5) 将反应温度升高到80—85'C，保温5小时，85—9(TC，保温5小时；(6) 将反应器温度降至30—40°C，滤出珠体，水洗；(7) 将水洗后的珠体转移至蒸馏器内蒸去珠体内的致孔剂，干燥，筛分；(8) 用酒精洗涤珠体内的低分子聚合物及残存的小分子物质即得大孔吸附树脂。
4、根据权利要求3述从菊米中分离纯化总黄酮的方法，其特征在于所述油相分散成珠体滴粒径在0.2-1.0mm范围定型。
5、根据权利要求1从菊米中分离纯化总黄酮的方法，其特征在于专用大孔吸附树脂使用以后的解吸再生，依次采用95%乙醇，0.4mol/L的HC1和0.4mol/L的NaOH，进行缓慢淋洗吸附柱，除去难于脱附的杂质，再用蒸馏水淋洗，去除NaOH，树脂的吸附能力恢复。
全文摘要
一种从菊米中分离纯化总黄酮的方法，采用总黄酮分离纯化专用大孔吸附树脂，动态吸附菊米中总黄酮，吸附饱和以后，采用动态解吸和蒸馏分离纯化提纯总黄酮；然后对一次纯化后的样品液采用同样的方式进行二次纯化；吸附柱内树脂床的高度与直径之比在5～13范围，调节提取液pH为5.0～6.0，控制室温条件≤35℃，控制提取液流速为每小时1～2BV，采用70％乙醇进行脱附，将脱附液蒸馏，除去乙醇后获总黄酮。本发明专用大孔吸附树脂对菊米中总黄酮的高效吸附，产品中总黄酮含量超过85％。
文档编号A61K133/00GK101332215SQ20081006342
公开日2008年12月31日申请日期2008年8月7日优先权日2008年8月7日
发明者崎何, 吴香梅, 姚彩萍, 熊春华申请人:浙江工商大学

文档序号 : 【 957712 】

技术研发人员：熊春华,姚彩萍,何崎,吴香梅
技术所有人：浙江工商大学

备注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
声明 ：此信息收集于网络，如果你是此专利的发明人不想本网站收录此信息请联系我们，我们会在第一时间删除

熊春华丨姚彩萍丨何崎丨吴香梅丨浙江工商大学

能吸附并分解甲醛的活性炭及其应用的制作方法部分中草药中具有减肥降脂作用的活性成分及相应药物的制作方法