糖尿病的预防和/或治疗药的制作方法
技术领域：
本发明涉及新型的糖尿病预防和/或治疗药。
背景技术：
已知法尼醇X受体(farnesoid X receptor；FXR)是以胆汁酸为配体的核内受体，该受体对将胆固醇变换为胆汁酸时作为限速酶的胆固醇7α羟化酶(cyp7α)的基因表达进行负向调节(非专利文献1)。作为该调节的原理，已知有如下路径FXR的活化会导致抑制性核内受体微小异源二聚体伙伴(small heterodimer partner；SHP)的表达增多，而SHP抑制cyp7α的表达(非专利文献2、3)。
据认为，使FXR活性发生变化的药剂对于胆固醇水平表现出异常高值或异常低值的疾病是有效的，已知作为降胆固醇剂的阴离子交换树脂就是通过吸附作为FXR内源性配体的胆汁酸来抑制FXR活性，从而增加cyp7α的表达(非专利文献4)。其结果表现为，由胆固醇变为胆汁酸的合成得到促进，因而其可用作降胆固醇剂。
并且，已知FXR形成核内受体维甲酸受体(retinoic acid receptor；RXR)和异源二聚体。已知该RXR与过氧化物酶体增殖活化受体(peroxisomeproliferator-activated receptor；PPAR)γ和PPARα等核内受体相互作用，这暗示出FXR活性的变化会对与PPARγ和PPARα等有关的肥胖、糖尿病或脂质异常等各种疾病有影响(专利文献1)。但是，还没有报告涉及对FXR的活性进行抑制以通过PPARγ和PPARα来抑制肝糖新生之类的内容。
并且，有报告指出，由于FXR的活化，肝糖新生酶中的磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase；PEPCK)和葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase；G6Pase)的表达通过SHP得到抑制(非专利文献5、专利文献2)。
但是，反过来却没有报告指出，FXR的活性受到抑制会导致肝糖新生受到抑制。
并且，已有报告指出，FXR的活化会导致能量代谢的亢进(专利文献3)。
但是，反过来却没有由于FXR的活性受到抑制而导致能量代谢亢进的报告。
关于以考来米得(colestimide)(商品名CHOLEBINE，三菱制药株式会社)为代表的作为降胆固醇剂而为人们所知的阴离子交换树脂，迄今已有涉及当其施用一定时间以后的血糖降低的报告(非专利文献6)、以及涉及其对合并2型糖尿病的高胆固醇血症患者的血糖日变化产生的影响的报告(专利文献4)。但是其作用机制尚未明确。
并且，目前还没有报告指出，现在使用的作为具有降血糖作用的药物的胰岛素制剂、磺酰脲剂、速效型胰岛素分泌促进剂、双胍类药剂、α葡糖苷酶抑制剂或格列酮类药剂可抑制FXR的活性。
也就是说，据本发明人所知，目前还没有关于FXR活性抑制剂对肝糖新生进行抑制、使能量代谢亢进的任何报告。
专利文献1国际公开小册子WO02/20463号专利文献2国际公开小册子WO03/59253号专利文献3国际公开小册子WO03/80803号专利文献4国际公开小册子WO03/11308号非专利文献1Science 1999，284(5418)1362-5非专利文献2Mol.Cell 2000，6，507-515非专利文献3Mol.Cell 2000，6，517-526非专利文献4J Biol Chem.2002，277(45)42588-95非专利文献5J Biol Chem.2004，279(22)23158-65非专利文献6临床医药12卷8号1996年6月1641页发明内容本发明的课题在于提供一种新型的糖尿病预防和/或治疗药。
本发明人鉴于上述现状反复进行了深入研究，结果发现抑制法尼醇X受体活性的物质对糖尿病的预防和/或治疗有效，从而实现了本发明。
即，本发明的要点如下。
(1)一种抑制肝糖新生的糖尿病的预防和/或治疗药，该预防和/或治疗药以抑制法尼醇X受体活性的物质为有效成分。
(2)一种使能量代谢亢进的糖尿病的预防和/或治疗药，该预防和/或治疗药以抑制法尼醇X受体活性的物质为有效成分。
(3)如上述2所述的糖尿病的预防和/或治疗药，其中，所述能量代谢的亢进为基础代谢的增加。
(4)如上述2所述的糖尿病的预防和/或治疗药，其中，所述能量代谢的亢进为产热的增加。
(5)如上述1或2所述的糖尿病的预防和/或治疗药，其中，该预防和/或治疗药提高胆固醇7a羟化酶的基因表达量。
(6)如上述1或2所述的糖尿病的预防和/或治疗药，其中，该预防和/或治疗药抑制微小异源二聚体伙伴的基因表达量。
(7)如上述1～6任一项所述的糖尿病的预防和/或治疗药，其中，所述抑制法尼醇X受体活性的物质为可药用的阴离子交换树脂或法尼醇X受体的拮抗剂。
(8)如上述7所述的糖尿病的预防和/或治疗药，其中，所述可药用的阴离子交换树脂具有胆汁酸吸附能力。
(9)如上述7或8所述的糖尿病的预防和/或治疗药，其中，所述可药用的阴离子交换树脂选自考来米得、考来烯胺树脂(cholestyramineresin)、考来替泊(colestipol)、盐酸司维拉姆(sevelamer hydrochloride)和盐酸考来维仑(colesevelam hydrochloride)。
(10)如上述7或8所述的糖尿病的预防和/或治疗药，其中，所述可药用的阴离子交换树脂是通过环氧氯丙烷(epichlorohydrin)衍生物和以咪唑衍生物为代表的胺类的聚合反应而合成的阴离子交换树脂。
(11)如上述7～10任一项所述的糖尿病的预防和/或治疗药，其中，所述可药用的阴离子交换树脂为考来米得。
根据本发明，可以提供一种糖尿病的预防和/或治疗药，该预防和/或治疗药以抑制法尼醇X受体活性的物质为有效成分。
图1是表示体重变化的图。
图2是表示摄食量变化的图。
图3是表示糖负荷后血浆中葡萄糖浓度变化的图。
图4是表示肝脏中cyp7α和SHP的基因表达量的图。
图5是表示肝脏中糖新生酶的基因表达量的图。
图6是表示肝脏中cyp7α和SHP的基因表达量的图。
图7是表示肝脏中糖新生酶的基因表达量的图。
图8是表示体重变化的图。
图9是表示组织重量的图。
图10是表示胰岛素负荷后血浆中葡萄糖浓度变化的图。
图11是表示糖负荷后血浆中葡萄糖浓度变化的图。
图12是表示氧消耗量的图。
图13是表示肝脏中cyp7α和SHP的基因表达量的图。
图14是表示褐色脂肪组织中PGC-1α、UCP-1和Dio2的基因表达量的图。
图15是表示糖负荷后血浆中葡萄糖浓度变化的图。
图16是表示肝脏中cyp7α和SHP的基因表达量的图。
图17是表示糖负荷后血浆中葡萄糖浓度变化的图。
图18是表示肝脏中cyp7α和SHP的基因表达量的图。
图19是表示糖负荷后血浆中葡萄糖浓度变化的图。
图20是表示肝脏中cyp7α和SHP的基因表达量的图。
具体实施例方式
下面详细说明本发明。
本发明中，法尼醇X受体是指以胆汁酸为配体的核内受体，其对抑制性核内受体微小异源二聚体伙伴(SHP)的基因表达进行正向调节，对将胆固醇变换为胆汁酸时作为限速酶的胆固醇7α羟化酶(cyp7α)的基因表达进行负向调节(Science 1999，284(5418)1362-5)。此处，FXR的活性可以根据cyp7α的基因表达量或SHP的基因表达量来测定。cyp7α的基因表达量和SHP的基因表达量可以利用实时定量PCR法(TaqMan UniversalPCR Master Mix(Applied Biosystems公司))等来测定。
本发明中，所述抑制法尼醇X受体活性的物质是指使cyp7α的基因表达量增加2倍～15倍左右的物质和/或使SHP的基因表达量减少20％～70％左右的物质。优选举出使cyp7α的基因表达量增加4倍～10倍左右的物质和/或使SHP的基因表达量减少30％～60％左右的物质，更优选举出使cyp7α的基因表达量增加8倍左右的物质和/或使SHP的基因表达量减少50％左右以上的物质。
本发明中，所述抑制肝糖新生是指，将作为肝糖新生酶的葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)和/或磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)等的基因表达量分别减少20％～70％左右，优选分别减少30％～70％左右。最优选分别减少40％左右。此处，G6Pase的基因表达量和PEPCK等的基因表达量可以利用上述的实时定量PCR法等来测定。
本发明中，所述能量代谢的亢进是指基础代谢和产热增加，基础代谢是指每单位体表面积的氧消耗量或每单位体重的氧消耗量。
本发明中，所述基础代谢增加是指，每单位体重的氧消耗量增加5％左右，优选增加10％～15％左右。
本发明中，所述产热增加是指，对褐色脂肪组织(Brown AdiposeTissue；BAT)中存在的与产热有关的蛋白质进行编码的基因的表达分别增加1.3倍～2倍左右，优选分别增加3倍～4倍左右。此处，在小动物的BAT中，作为与产热有关的蛋白质，可以举出脱碘酶2(Deiodinase 2；Dio2)、解偶联蛋白1(Uncoupler Protein 1；UCP-1)、PPARγ共激活因子-1a(PPAR gamma coactivator 1a；PGC-1a)等。Dio2是指将甲状腺激素的T4(甲状腺素)转变为T3(三碘甲状腺原氨酸)的酶。T3的主要作用是代谢亢进(基础代谢量和产热的增加)。并且，UCP-1具有将由于ADP的氧化磷酸化的解偶联(uncoupling)、即异化所产生的能量直接变为热量而不变为ATP等高能磷酸化合物的作用。PGC-1a为核内转录因子的共激活因子(coactivator)，对UCP-1或Dio2的基因表达进行正向调节。
本发明中，所述可药用的阴离子交换树脂指的是可以作为医药品进行施用的阴离子交换树脂，例如优选为具有胆汁酸吸附能力的阴离子交换树脂。另外，如后面的实施例所示，施用该阴离子交换树脂时，只要能够显示出对肝糖新生的抑制或能量代谢的亢进即可，不做特别限制。
作为其最优选的一个示例，可以举出考来米得(2-甲基咪唑和环氧氯丙烷的共聚物)。考来米得具有不规则地错综组装的复杂的立体结构，该物质由如下式(I)的基本结构表示，并且该式(I)的结构可部分地由如下式(II)表示，该物质是通过环氧氯丙烷衍生物和以咪唑衍生物为代表的胺类的聚合反应而得到的，即，通过日本特开昭60-209523号公报中所记载的制造方法而制得。
另外，考来米得在JAN中登记的通用名是colestimide(考来米得，化学名2-甲基咪唑-环氧氯丙烷共聚物)，在INN中登记的通用名是colestilan(考来替兰，化学名1-氯-2，3环氧丙烷与2-甲基咪唑的聚合物)。
作为其他优选的阴离子交换树脂，可以举出Sigma公司市售的考来烯胺树脂和考来替泊(加成有(氯甲基)环氧乙烷的N-(2-氨乙基)-N’-[2-[(2-氨乙基)氨基]乙基]-1，2-乙二胺聚合物)等。另外，所述考来烯胺树脂是包含加成了季铵基团的苯乙烯-二乙烯苯共聚物的强碱性阴离子交换树脂，其基本结构由以下的式(III)表示。
并且，盐酸司维拉姆的基本结构如下式所示，该物质可通过美国专利第5496545号公报中所述的方法或参照该方法的方法制得。
盐酸考来维仑的基本结构如下式所示，该物质可由美国专利第5607669号公报中所述的方法或参照该方法的方法制得。
另外，只要不超出本发明要旨的范围，特表平9-504782号、9-500368号、10-501264号、10-501842号、11-507093号、11-512074号和5-512332号公报以及特开平8-208750号、9-202732号、10-114661号和11-228449号公报等中所述的阴离子交换树脂也可用于本发明。
本发明中，所述法尼醇X受体的拮抗剂不受特别限制，只要能在施用时表现出对肝糖新生的抑制或能量代谢的亢进即可，也可以是低分子化合物。另外，可以认为已知与胆汁酸(其为FXR的内源性配体)由肠管再吸收至肝脏(肠肝循环)有关的转运体(transporter)和抑制胆汁酸结合蛋白的物质也包含在本发明的糖尿病预防和/或治疗药中。作为转运体的具体例，可以举出回肠刷状缘钠盐依赖性胆汁酸转运体/回肠胆汁酸转运体(ASBT/IBAT)和Na+/牛磺胆酸共转运体多肽(NTCP)等，作为胆汁酸结合蛋白，可以举出回肠胆汁酸结合蛋白(IBABP)等。
本发明的糖尿病预防和/或治疗药可以直接使用作为有效成分的上述化合物，但优选利用通用的制剂用添加剂制造含有上述有效成分的药物组合物来使用。
作为所述药物组合物，可以举出片剂、胶囊剂、微粒剂、丸剂、锭剂(troche)、液体制剂等，它们用于经口服用(包括舌下服用)。
口服的药物组合物可通过例如混合、填充或打锭等现有技术广泛使用的方法制得。此外，可以通过反复的配制操作使该有效成分分布于使用了大量填充剂的药物组合物中。例如，优选以单位剂量的形式提供用于口服的片剂或胶囊剂，并且它们可以包含粘合剂、填充剂、稀释剂、打锭剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、香味剂和湿润剂等常用的制剂用载体。可根据本领域公知方法制造片剂，例如采用包衣剂将其制成包衣片。
作为优选的填充剂，可列举例如纤维素、甘露醇或乳糖等，还可以使用作为崩解剂的淀粉、聚乙烯基吡咯烷酮、淀粉乙醇酸钠等淀粉衍生物等以及作为润滑剂的十二烷基硫酸钠等作为制剂用添加剂。口服的液体制剂形式的药物组合物可以是例如水性或油性悬浮液、溶液、乳液、糖浆剂或酏剂等药物组合物的形式；或者是可在使用前再溶解于水或适当介质中的干燥的药物组合物的形式。
在这种液体制剂中，可加入常用的添加剂，例如，山梨糖醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂之类的防沉淀剂；卵磷脂、山梨聚糖单油酸酯或阿拉伯胶之类的乳化剂；杏仁油、精制椰子油或甘油酯等的油性酯；丙二醇或乙醇之类的非水性介质(可包括食用油)；对羟基苯甲酸的甲酯、乙酯或丙酯或者山梨酸之类的防腐剂；以及根据需要使用的常规的香味剂或着色剂等。
上述口服药物组合物为例如片剂、胶囊剂或微粒剂等的情况下，通常含有5重量％～95重量％的所述有效成分，优选含有25重量％～90重量％的所述有效成分。
另外，考来米得由三菱制药株式会社以商品名“cholebine”出售，在本发明中，可以直接使用cholebine。
对于本发明的糖尿病预防和/或治疗药的给药量，可以根据所使用的有效成分、患者的年龄、健康状态、体重、疾病的严重程度、同时进行的治疗-处置的类型和频率以及所需疗效的性质等因素来适当决定。一般来说，以考来米得为例，可将成人的每日给药量定为1g～60g有效成分，每日一次或分数次给药。
实施例下面举出实施例进一步具体说明本发明，但本发明并不限于这些实施例。另外，下面使用的考来米得是按照特开昭60-209523号公报中记载的方法制造的。
实施例1试验方法使用KKAy小鼠(雄性，日本CLEA，5周龄，N＝4～5)。对照组喂食正常食物，考来米得组喂食含有2％考来米得的正常食物(UAR公司(Villemoison sur Orge，法国))。
12天后按照通常的方法进行口服糖负荷试验。在葡萄糖负荷前进行采血，然后按照2g/kg体重的比例口服给予葡萄糖溶液，测定30、60、90、120分钟后的血糖值。
在试验的1周后，取出小鼠的肝脏，利用实时定量PCR法对胆汁酸合成酶cyp7α、抑制性核内受体SHP、糖新生酶PEPCK和G6Pase的基因表达量(相关的mRNA水平)进行测定。
用于实时定量PCR反应的引物序列分别为，对Cyp7α使用了序列表的序列号1和2的序列，对SHP使用了序列表的序列号3和4的序列，对PEPCK使用了序列表的序列号5和6的序列，对G6Pase使用了序列表的序列号7和8的序列。
结果(1)体重图1中表示出对照组(■)和考来米得组(●)的体重变化。如图1所示，与对照组的体重相比，考来米得组的体重显示出较低值。
(2)摄食量图2中表示出对照组(■)和考来米得组(●)的摄食量变化。如图2所示，考来米得组的摄食量与对照组的摄食量在给食期间几乎为同样的变化。
(3)糖负荷试验图3中表示出对照组(■)和考来米得组(●)在糖负荷后血浆中葡萄糖浓度(mg/ml)的变化。如图3所示，考来米得组中，葡萄糖负荷前的血糖值比对照组大约低30％。
并且，对于葡萄糖负荷后的血糖值，考来米得组也比对照组更快地降低。
(4)肝脏中的cyp7α和SHP的基因表达图4中示出结果。与对照组相比，考来米得组中的cyp7α的基因表达量显著增加，其表达量约为对照组的8倍以上，而SHP的基因表达量减少了50％以上。该结果表明，考来米得使肝脏中的FXR活性受到抑制，使胆汁酸合成的负向调节得到解除。
(5)肝脏中的糖新生酶的基因表达图5中示出结果。与对照组相比，考来米得组中的PEPCK和G6Pase的基因表达量都受到了抑制。该结果表明，考来米得使肝脏中的糖新生反应受到抑制。
以上的结果显示出，考来米得引起肝脏中FXR的活性的抑制，抑制肝糖的新生。
实施例2
试验方法使用KKAy小鼠(雄性，日本CLEA，5周龄，N＝6)。以10mg/kg的用量经口施用作为FXR激动剂的GW-4064(J.Med.Chem.2000，43卷(16)，2971～2974页)四天。第5天时解剖小鼠，取出肝脏。利用定量PCR法测定肝脏中cyp7α、SHP和PEPCK的基因表达量。另外，用于实时定量PCR反应的引物序列与实施例1相同。
结果(1)肝脏中的cyp7α和SHP的基因表达图6中示出结果。与对照组相比，GW-4064组中的cyp7α的基因表达量减少(图6-1)，而SHP的基因表达量增加(图6-2)。该结果表明，作为FXR激动剂的GW-4064对肝脏中由于FXR活性的上升所致的胆汁酸的合成进行了负向调节。
(2)肝脏中的糖新生酶的基因表达图7中示出结果。与对照组相比，GW-4064组中的PEPCK的基因表达量增加。该结果表明，作为FXR激动剂的GW-4064使肝脏中的糖新生反应亢进。
以上的结果显示出，作为FXR激动剂的GW-4064引起肝脏中FXR活性的上升，使肝糖的新生亢进。
实施例3试验方法使用C57BL6小鼠(雄性，法国查尔斯河实验室公司(l’Arbresle，法国)，5周龄，N＝4～5)。印度穆库尔没药(guggulipid)是作为高血脂症治疗药的通用药物，在本发明中，该药物使用Syntrax Innovations公司所销售的产品。
对照组(HFD-对照)喂食高脂肪食物(35.9％脂肪，UAR公司(Villemoison sur Orge，法国))，印度穆库尔没药组(HFD-印度穆库尔没药)喂食含有2.5％印度穆库尔没药的高脂肪食物，考来米得组(HDF-考来米得)喂食含有2％考来米得的高脂肪食物。
给药第8周时按照通常的方法进行胰岛素负荷试验。在胰岛素负荷前进行采血，然后腹腔注射胰岛素，测定30、60、90分钟后的血糖值。
给药第9周时按照通常的方法进行口服糖负荷试验。在葡萄糖负荷前进行采血，然后口服给予葡萄糖溶液，测定30、60、90、120分钟后的血糖值。
给药第12周时利用基础代谢测定装置(Oxymax，ColumbusInstruments公司)测定氧消耗量。
给药第13周时取出小鼠的肝脏、副睾丸周围白色脂肪组织、褐色脂肪组织并测定重量。并且，利用实时定量PCR法对肝脏中的胆汁酸合成酶cyp7α、抑制性核内受体SHP的基因表达量、褐色脂肪组织中的3种与产热有关的蛋白质(1.PPARγ共激活因子-1a(PGC-1a)、2.解偶联蛋白1(UCP-1)、3.脱碘酶2(Dio2))的基因表达量进行测定。
用于实时定量PCR反应的引物序列分别为，对Cyp7α使用了序列表的序列号1和2的序列，对SHP使用了序列表的序列号3和4的序列，对PGC-1a使用了序列表的序列号9和10的序列，对UCP-1使用了序列表的序列号11和12的序列，对Dio2使用了序列表的序列号13和14的序列。
结果(1)体重图8中表示出对照组(●)、印度穆库尔没药组(■)和考来米得组(▲)的体重变化。如图8所示，与对照组的体重相比，印度穆库尔没药组和考来米得组的体重显示出较低值。
(2)脏器重量图9中示出结果。与对照组的体重相比，印度穆库尔没药组和考来米得组的副睾丸周围脂肪组织的重量(图9-1)、褐色脂肪组织的重量(图9-2)降低，并且考来米得组中肝脏的重量(图9-3)也降低。
(3)胰岛素负荷试验图10中表示出对照组(●)、印度穆库尔没药组(■)和考来米得组(▲)在胰岛素负荷后血浆中葡萄糖浓度(mg/ml)的变化。如图10所示，与对照组相比，印度穆库尔没药组和考来米得组中胰岛素负荷后的血糖值降低。
(4)糖负荷试验图11中表示出对照组(●)、印度穆库尔没药组(■)和考来米得组(▲)在糖负荷后血浆中葡萄糖浓度(mg/ml)的变化。如图11所示，与对照组相比，印度穆库尔没药组和考来米得组中糖负荷后的血糖值迅速降低。
(5)氧消耗量图12中示出结果。与对照组相比，印度穆库尔没药组和考来米得组中，每单位体重的氧消耗量增加。
该结果显示出，印度穆库尔没药和考来米得使基础代谢增加。
(6)肝脏中的cyp7α和SHP的基因表达图13中示出结果。与对照组相比，印度穆库尔没药组和考来米得组中的cyp7α的基因表达量显著增加，而SHP的基因表达量减少了大约50％。
该结果显示出，印度穆库尔没药和考来米得使肝脏中的FXR活性受到抑制，使胆汁酸合成的负向调节得到解除。
(7)褐色脂肪组织中PGC-1a、UCP-1和Dio2的基因表达图14中示出结果。与对照组相比，印度穆库尔没药组和考来米得组中的上述所有基因表达量都增加了。
该结果显示出，印度穆库尔没药和考来米得使褐色脂肪组织中的产热反应增加。
以上的结果表明，考来米得使得肝脏中FXR的活性得到抑制，使能量代谢亢进。
实施例4试验方法使用KKAy小鼠(雄性，日本CLEA，N＝8)。对照组喂食高脂肪食物(23.6％脂肪)，考来米得组喂食含有2％考来米得的高脂肪食物。给药第4周时，按通常的方法进行糖负荷试验。将小鼠绝食一晚，进行葡萄糖负荷前的采血，然后按照1g/kg体重的比例口服给予葡萄糖溶液，测定30、60、90、120分钟后的血糖值。给药第6周时解剖小鼠取出肝脏。利用定量PCR法测定肝脏中cyp7α和SHP的基因表达量。另外，用于实时定量PCR反应的引物序列与实施例1相同。
结果(1)糖负荷试验图15中表示出对照组(●)和考来米得组(▲)在糖负荷后血浆中葡萄糖浓度(mg/ml)的变化。
如图15所示，与对照组相比，考来米得组中，葡萄糖负荷后的血糖值迅速降低。
(2)肝脏中的cyp7α和SHP的基因表达图16中示出结果。与对照组相比，考来米得组中的cyp7α的基因表达量约增加5.5倍，而SHP的基因表达量减少了大约60％。
该结果显示出，考来米得使肝脏中的FXR活性受到抑制，使胆汁酸合成的负向调节得到解除。
实施例5试验方法使用KKAy小鼠(雄性，日本CLEA，N＝8)。对照组喂食高脂肪食物(23.6％脂肪)，盐酸考来维仑组喂食含有2％盐酸考来维仑的高脂肪食物。给药第4周时，按通常的方法进行糖负荷试验。将小鼠绝食一晚，进行葡萄糖负荷前的采血，然后按照1g/kg体重的比例口服给予葡萄糖溶液，测定30、60、90、120分钟后的血糖值。给药第6周时解剖小鼠取出肝脏。利用定量PCR法测定肝脏中cyp7α和SHP的基因表达量。另外，用于实时定量PCR反应的引物序列与实施例1相同。
结果(1)糖负荷试验图17中表示出对照组(●)和盐酸考来维仑组(▲)在糖负荷后血浆中葡萄糖浓度(mg/ml)的变化。
如图17所示，与对照组相比，盐酸考来维仑组中，葡萄糖负荷后的血糖值迅速降低。
(2)肝脏中的cyp7α和SHP的基因表达图18中示出结果。与对照组相比，盐酸考来维仑组中的cyp7α的基因表达量约增加5.4倍，而SHP的基因表达量减少了大约20％。
该结果显示出，盐酸考来维仑使肝脏中的FXR活性受到抑制，使胆汁酸合成的负向调节得到解除。
实施例6试验方法使用KKAy小鼠(雄性，日本CLEA，N＝8)。对照组喂食高脂肪食物(23.6％脂肪)，盐酸司维拉姆组喂食含有2％盐酸司维拉姆的高脂肪食物。给药第4周时，按通常的方法进行糖负荷试验。将小鼠绝食一晚，进行葡萄糖负荷前的采血，然后按照1g/kg体重的比例口服给予葡萄糖溶液，测定30、60、90、120分钟后的血糖值。给药第6周时解剖小鼠取出肝脏。利用定量PCR法测定肝脏中cyp7α和SHP的基因表达量。另外，用于实时定量PCR反应的引物序列与实施例1相同。
结果(1)糖负荷试验图19中表示出对照组(●)和盐酸司维拉姆组(▲)在糖负荷后血浆中葡萄糖浓度(mg/ml)的变化。
如图19所示，与对照组相比，盐酸司维拉姆组中，葡萄糖负荷后的血糖值迅速降低。
(2)肝脏中的cyp7α和SHP的基因表达图20中示出结果。与对照组相比，盐酸司维拉姆组中的cyp7α的基因表达量约增加5.9倍，而SHP的基因表达量减少了大约60％。
该结果显示出，盐酸司维拉姆使肝脏中的FXR活性受到抑制，使胆汁酸合成的负向调节得到解除。
工业上的可利用性根据本发明，可以提供一种新型的糖尿病的预防和/或治疗药。
另外，本申请要求日本专利申请特愿2004-301027号及特愿2005-152124号的优先权。
序列表<110>三菱制药株式会社<120>糖尿病的预防和/或治疗药<130>MP5154WO<150>JP2004-301027<151>2004-10-15<150>JP2005-152124<151>2005-05-25<160>14<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>26<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>发明人铃木一夫；坂井薰；石井伸一；杉本佳奈美；约翰·奥威尔斯；渡边光博<220>
<223>引物<400>1agcaactaaa caacctgcca gtacta 26<210>2<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>2gtccggatat tcaaggatgc a 21<210>3<211>22<212>DNA<213>人工序列
<220>
<223>引物<400>3caaggagtat gcgtacctga ag 22<210>4<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>4ggctccaaga cttcacacag t 21<210>5<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>5ccacagctgc tgcagaaca 19<210>6<211>18<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>6gaagggtcgc atggcaaa 18<210>7<211>25<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物
<400>7ccggatctac cttgctgctc acttt25<210>8<211>26<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>8tagcaggtag aatccaagcg cgaaac 26<210>9<211>23<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>9aagtgtggaa ctctctggaa ctg 23<210>10<211>23<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>10gggttatctt ggttggcttt atg 23<210>11<211>23<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>11ggcccttgta aacaacaaaa tac 23
<210>12<211>23<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>12ggcaacaaga gctgacagta aat23<210>13<211>20<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>13gcacgtctcc aatcctgaat20<210>14<211>20<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>14tgaaccaaag ttgaccacca20
权利要求
1.一种抑制肝糖新生的糖尿病的预防和/或治疗药，该预防和/或治疗药以抑制法尼醇X受体活性的物质为有效成分。
2.一种使能量代谢亢进的糖尿病的预防和/或治疗药，该预防和/或治疗药以抑制法尼醇X受体活性的物质为有效成分。
3.如权利要求2所述的糖尿病的预防和/或治疗药，其中，所述能量代谢的亢进为基础代谢的增加。
4.如权利要求2所述的糖尿病的预防和/或治疗药，其中，所述能量代谢的亢进为产热的增加。
5.如权利要求1或2所述的糖尿病的预防和/或治疗药，其中，该预防和/或治疗药提高胆固醇7a羟化酶的基因表达量。
6.如权利要求1或2所述的糖尿病的预防和/或治疗药，其中，该预防和/或治疗药抑制微小异源二聚体伙伴的基因表达量。
7.如权利要求1～6任一项所述的糖尿病的预防和/或治疗药，其中，所述抑制法尼醇X受体活性的物质为可药用的阴离子交换树脂或法尼醇X受体的拮抗剂。
8.如权利要求7所述的糖尿病的预防和/或治疗药，其中，所述可药用的阴离子交换树脂具有胆汁酸吸附能力。
9.如权利要求7或8所述的糖尿病的预防和/或治疗药，其中，所述可药用的阴离子交换树脂选自考来米得、考来烯胺树脂、考来替泊、盐酸司维拉姆和盐酸考来维仑。
10.如权利要求7或8所述的糖尿病的预防和/或治疗药，其中，所述可药用的阴离子交换树脂是通过环氧氯丙烷衍生物和以咪唑衍生物为代表的胺类的聚合反应而合成的阴离子交换树脂。
11.如权利要求7～10任一项所述的糖尿病的预防和/或治疗药，其中，所述可药用的阴离子交换树脂为考来米得。
全文摘要
本发明提供一种糖尿病的预防和/或治疗药，该药物以抑制法尼醇X受体活性的物质为有效成分。
文档编号A61K31/74GK101039697SQ200580035300
公开日2007年9月19日 申请日期2005年10月14日 优先权日2004年10月15日
发明者铃木一夫, 坂井薰, 石井伸一, 杉本佳奈美, 约翰·奥威尔斯, 渡边光博 申请人:三菱制药株式会社
文档序号 :
【 1110554 】
技术研发人员：铃木一夫,坂井薰,石井伸一,杉本佳奈美,约翰.奥威尔斯,渡边光博
技术所有人：三菱制药株式会社
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
声 明 ：此信息收集于网络，如果你是此专利的发明人不想本网站收录此信息请联系我们，我们会在第一时间删除
技术研发人员：铃木一夫,坂井薰,石井伸一,杉本佳奈美,约翰.奥威尔斯,渡边光博
技术所有人：三菱制药株式会社
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