一种山豆根提取物的精制工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中药山豆根提取物的精制工艺，具体涉及一种二次柱色谱法山豆根提取物的精制工艺。
背景技术：
山豆根，是豆科植物越南槐(Sophora Ton kinensis Gagnep.)的干燥根及根茎。主要产于广西、广东、贵州等省，性味苦寒，归肺、胃经。中国药典2005年版记载山豆根具有清热解毒，消肿利咽的功效。山豆根的主要成分为生物碱类，包括苦参碱、氧化苦参碱、臭豆碱和甲基金雀花碱。黄酮类包括广豆根素、广豆根酮、环广豆根素、环广豆根酮、染料木素等。现代研究山豆根有用于治疗肝炎的报道，并有用山豆根的生物碱治疗肝炎的报道。
中国专利CN85100392B公开了一种从植物山豆根中提取治疗肝炎用药的方法。该发明所述的方法包括将山豆根片用水煎煮，煎煮液用乙醇沉淀，药液用有机溶剂萃取，调节被萃取过的药液至pH1～3，冷藏，滤除沉淀，再用乙醇沉淀药液中杂质，药液的醇含量为80～90度。
中国专利00114056.6公开了一种山豆根提取物及其提取方法与用途，该方法是将山豆根用水浸泡后加热提取，再经0～3次热水提取后，过滤，合并水提取液，浓缩，加乙醇使含醇量达80％，取醇沉部分。
中国专利02111740.3公开了山豆根的口服制剂、制备方法及应用。其山豆根的活性成分提取物由下述方法制得将山豆根饮片洗净粉碎后，分别用5倍量的0.3～10％稀酸溶液浸渍三次，合并浸渍液浓缩，用碱溶液调节溶液pH值9-10，过滤，滤取沉淀物，用80％乙醇回流提取2次，每次2小时，合并乙醇液，回收乙醇，药物用水稀释，用稀酸溶液调节pH值为3，过滤用碱溶液调节pH值至6-7，过滤，再调节溶液pH值为8-10，过滤，滤取沉淀干燥，即为山豆根总碱提取物，苦参碱含量≥70％。
目前市售的山豆根注射液或称肝炎灵注射液是含山豆根总生物碱的制剂，2ml含山豆根总生物碱50mg，含标识苦参碱(C15H24N2O)为35mg。该注射液经长期临床应用显示，能够降低转氨酶，提高机体免疫力，对慢性活动性肝炎具有较好疗效。该制剂采用专利CN85100392B所公开的方法制备。
但病毒性肝炎以轻症、无症状或慢性者较多，需长期用药，而长期使用肝炎灵注射液，除疼痛外，注射部位易发炎、起肿块，难以长期坚持，而且ALT反跳时减量不便，从而影响治疗效果。文献还报道患者肌注肝炎灵后，出现头晕、心跳、恶心呕吐和过敏等不良反应。
采用前述几种方法提取制备的山豆根制剂，也均存在一个共同的缺陷副作用较大，容易引起头晕、心跳、恶心呕吐和过敏等不良反应，影响治疗效果。
发明内容本发明的目的在于克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种杂质含量少，副作用小的山豆根活性成份的精制工艺。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的。
研究表明，现有山豆根提取物制剂副作用较大，与山豆根提取物中杂质含量较多有密切关系。
因此，本发明提供包含下列步骤的精制工艺(1)溶解将采用公知方法制备得到的山豆根浓缩粗提取物，加入0.5～1.5(优选0.8～1.2)倍量的热水溶化，调节溶液的pH值至2～8(优选pH4-6)；(2)一次上柱将步骤(1)所得的溶液加入到已经装柱的大孔树脂中；(3)洗脱先用蒸馏水洗至洗脱液的pH至7，水洗脱液另器收集备用，然后用40％～60％(优选50％～56％)的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；(4)浓缩将步骤(3)收集的乙醇洗脱液浓缩，挥去乙醇，得浓缩液；(5)二次上柱将步骤(3)中的水洗脱液用碱溶液调节pH值至4.0～11.0(优选6.0～9.0)，加入到已经装柱的大孔树脂中；所用的碱溶液可以是氢氧化钠、氢氧化钾或者其他碱性化合物溶液，优选氢氧化钠溶液；(6)二次洗脱将步骤(5)已经上柱的大孔树脂先用pH值为8.5～10.0(优选(9.0～9.5)的碱性溶液洗至洗脱液的pH值≥7(优选≥8)，然后再用蒸馏水洗至洗脱液pH为7，最后采用40～60％(优选50％～56％)的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，并回收乙醇；(7)二次浓缩、保温、过滤将步骤(6)所得的乙醇洗脱液浓缩，挥去乙醇，然后加入活性炭，75～95℃保温25-35分钟(优选80℃保温30分钟)，趁热过滤，得滤液；(8)再次浓缩将步骤(4)所得的浓缩液和步骤(7)所得的滤液合并，浓缩，即得山豆根的精制浓缩提取物。
本发明之山豆根提取物精制工艺能够充分地将山豆根中活性成分提取出来，精制过程中，活性成分损失少，精制提取物杂质含量少，活性成分纯度高，副作用少，几无头晕、心跳、恶心呕吐和过敏等不良反应，疗效好；操作简单，方便；产品质量易于控制。
具体实施方式下面结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例1(1)取采用公知方法制备得到的山豆根粗提取物，加入1倍量的热水溶化，调节溶液的pH值至4；(2)将步骤(1)所得的溶液加入到已经装柱的大孔树脂中；(3)先用蒸馏水洗至洗脱液的pH至7，水洗脱液另器收集备用，然后用50％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；(4)将步骤(3)中的50％的乙醇溶液洗脱液浓缩，挥去乙醇，即得浓缩液；(5)将步骤(3)中的水洗脱液用氢氧化钠溶液调节pH值至8，加入到已经装柱的大孔树脂中；(6)将步骤(5)中已经上柱的大孔树脂先用pH值为9.5的氢氧化钠溶液洗至洗脱液的pH值为8.3，然后再用蒸馏水洗至洗脱液为pH为7，最后采用55％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；(7)将步骤(6)所得洗脱液浓缩，挥去乙醇，然后加入活性炭，75℃保温35分钟，趁热过滤，得滤液；(8)将步骤(4)所得的浓缩液和步骤(7)所得的滤液合并，浓缩，得山豆根的精制提取物。
取所述山豆根精制提取物配制成17.5mg/ml(以生物总碱计算)的溶液，腹腔注射，按5ml/kg的量给猫注射，观察30分钟，无抽筋、呕吐等现象。而未精制过的山豆根提取物，同样方法操作，按1ml/kg的量注射，即出现抽筋、呕吐等现象。
实施例2(1)取采用公知方法制备得到的山豆根粗提取物，加入0.8倍量的热水溶化，调节溶液的pH值至6；(2)将步骤(1)所得的溶液加入到已经装柱的大孔树脂中；(3)将步骤(2)中已经上柱的大孔树脂先用蒸馏水洗至pH至7，水洗脱液另器收集备用，然后用56％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；(4)将步骤(3)中的56％的乙醇溶液洗脱液浓缩，挥去乙醇，即得浓缩液；(5)将步骤(3)中的水洗脱液用氢氧化钾溶液调节pH值至9，加入大已经装柱的大孔树脂中；(6)将步骤(5)中已经上柱的大孔树脂先用pH值为9.3的氢氧化钾溶液洗至洗脱液的pH值为8，然后再用蒸馏水洗至洗脱液为pH为7，最后采用60％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；(7)将步骤(6)所得乙醇洗脱液浓缩，挥去乙醇，然后加入活性炭，95℃保温25分钟，趁热过滤，即得滤液；(8)浓缩将步骤(4)所得的浓缩液和步骤(7)所得的滤液合并，浓缩，得山豆根的精制提取物。
取所述山豆根精制提取物配制成17.5mg/ml(以生物总碱计算)的溶液，腹腔注射，按5ml/kg的量给猫注射，观察30分钟，均无抽筋、呕吐等现象。而未精制过的山豆根提取物，同样方法操作，按1ml/kg的量注射，即出现抽筋、呕吐等现象。
实施例3(1)将采用公知方法制备得到的山豆根浓缩粗提取物，加入1.2倍量的热水溶化，调节溶液的pH值至7；(2)将步骤(1)所得的溶液加入到已经装柱的大孔树脂中；(3)将步骤(2)中已经上柱的大孔树脂先用蒸馏水洗至洗脱液的pH至7，水洗脱液另器收集备用，然后用60％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；(4)将步骤(3)收集的乙醇洗脱液浓缩，挥去乙醇，得浓缩液；(5)将步骤(3)中的所收集的水洗脱液用氢氧化钾溶液调节pH值至9.0，加入到已经装柱的大孔树脂中；(6)将步骤(5)中已经上柱的大孔树脂先用pH值为10.0的碱性溶液洗至洗脱液的pH值为8，然后再用蒸馏水洗至洗脱液pH为7，最后采用60％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；(7)将步骤(6)的乙醇洗脱液浓缩，挥去乙醇，然后加入活性炭，80℃保温30分钟，趁热过滤，得滤液；(8)将步骤(4)所得的浓缩液和步骤(7)所得的滤液合并，浓缩，即得山豆根的精制提取物。
取所述山豆根精制提取物配制成17.5mg/ml(以生物总碱计算)的溶液，腹腔注射，按5ml/kg的量给猫注射，观察30分钟，均无抽筋、呕吐等现象。而未精制过的山豆根提取物，同样方法操作，按1ml/kg的量注射，即出现抽筋、呕吐等现象。
权利要求
1.一种山豆根提取物的精制工艺，其特征在于，包括以下步骤(1)溶解将采用公知方法制备得到的山豆根浓缩粗提取物，加入0.5～1.5倍量的热水溶化，调节溶液的pH值至2～8；(2)一次上柱将步骤(1)所得的溶液加入到已经装柱的大孔树脂中；(3)洗脱先用蒸馏水洗至洗脱液的pH至7，水洗脱液另器收集备用，然后用40％～60％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；(4)浓缩将步骤(3)收集的乙醇洗脱液浓缩，挥去乙醇，得浓缩液；(5)二次上柱将步骤(3)中的水洗脱液用碱溶液调节pH值至4.0～11.0，加入到已经装柱的大孔树脂中，所用的碱溶液可以是氢氧化钠、氢氧化钾或者其他碱性化合物溶液，优选氢氧化钠溶液；(6)二次洗脱将步骤(5)已经上柱的大孔树脂先用pH值为8.5～10.0的碱性溶液洗至洗脱液的pH值≥7，然后再用蒸馏水洗至洗脱液pH为7，最后采用40～60％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，并回收乙醇；(7)二次浓缩、保温、过滤将步骤(6)所得的乙醇洗脱液浓缩，挥去乙醇，然后加入活性炭，75～95℃保温25-35分钟，趁热过滤，得滤液；(8)再次浓缩将步骤(4)所得的浓缩液和步骤(7)所得的滤液合并，浓缩，即得山豆根的精制浓缩提取物。
2.根据权利要求
1所述的山豆根提取物精制工艺，其特征在于，所述的山豆根粗提取物加入0.8～1.2倍量的热水溶解，调节溶液的pH值至4-6。
3.根据权利要求
1或2所述的山豆根提取物精制工艺，其特征在于，所述一次上柱时选用50～56％的乙醇溶液进行洗脱。
4.根据权利要求
1或2所述的山豆根提取物精制工艺，其特征在于，所述的一次上柱的水洗脱液用碱溶液调pH值至6.0～9.0，再进行二次上柱。
5.根据权利要求
1或2所述的山豆根提取物的精制工艺，其特征在于，所述的二次上柱采用pH值9.0～9.5的碱溶液洗脱至洗脱液pH值≥8。
6.根据权利要求
3所述的山豆根提取物的精制工艺，其特征在于，所述的二次上柱采用pH值9.0～9.5的碱溶液洗脱至洗脱液pH值≥8。
7.根据权利要求
4所述的山豆根提取物的精制工艺，其特征在于，所述的二次上柱采用pH值9.0～9.5的碱溶液洗脱至洗脱液pH值≥8。
8.根据权利要求
1或2所述的山豆根提取物的精制工艺，其特征在于，所述的二次上柱选用的乙醇洗脱溶液为50～56％的乙醇溶液。
9.根据权利要求
1或2所述的山豆根提取物的精制工艺，其特征在于，所述第(7)步保温温度为80℃，保温时间为30分钟。
10.根据权利要求
1或2所述的山豆根提取物的精制工艺，其特征在于，所述碱性溶液为氢氧化钠溶液。
专利摘要
本发明公开了一种山豆根提取物的精制工艺，该工艺是采用二次柱色谱法进行分离提纯，收集40～60％乙醇洗脱液作为山豆根提取物。本发明之山豆根提取物精制工艺能够充分地将山豆根中活性成分提取出来，活性成分损失少，精制提取物杂质含量少，活性成分纯度高，副作用少，几无头晕、心跳、恶心呕吐和过敏等不良反应，疗效好；操作简单，方便；产品质量易于控制。
文档编号A61P11/04GK1994364SQ200610136992
公开日2007年7月11日 申请日期2006年12月30日
发明者周应军, 潘善庆, 谭华, 吴健民 申请人:湖南康普制药有限公司, 周应军导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan
文档序号 :
【 86091 】
技术研发人员：周应军,潘善庆,谭华,吴健民
技术所有人：湖南康普制药有限公司,周应军
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
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技术研发人员：周应军,潘善庆,谭华,吴健民
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