一种自乳化疫苗佐剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及疫苗佐剂领域，具体涉及一种新的自乳化的疫苗佐剂及其制备方法。
背景技术：
高度纯化的新型疫苗虽具良好的抗原特异性和低毒性，但免疫原性低，需要配合高效的佐剂使用。佐剂是先于抗原或同时注射于动物体内，能非特异性地改变或增强机体对抗原的特异性免疫应答的物质，也称免疫增强剂。
由于疫苗研制日益变得复杂，同样对佐剂也提出了更高的要求；例如生物化学专家发现先将疫苗中的有效抗原进行纯化(有效抗原通常是指细菌或病毒中那些能刺激免疫反应的组成部分，也称主要免疫抗原)，纯化后的抗原能提高免疫效果，减少或避免部分副作用(不良反应)，这种疫苗称为亚单位疫苗。不过，这些相对较小较少的免疫抗原，要在更大程度上依赖疫苗佐剂来增强免疫反应；其他生产制造技术上的改进创新，如延缓抗原释放速度，能延长疫苗的免疫有效期，这些通常都是改进疫苗佐剂的结果。所以研究开发新的佐剂技术，从而提高疫苗抗原刺激产生的免疫力并使疫苗(人用与兽用)更有效更安全，这是全球各大疫苗厂商进行研究和开发的重点领域。
油乳剂疫苗是目前国内外疫苗市场上产品最多的类型之一，油乳剂疫苗有三种类型1)油包水(W/O)型。此剂型应用最普遍，显著优点是可获得高水平持久的免疫增强效果。缺点是较粘稠，注射较困难。2)水包油(O/W)型。为减少乳剂中油含量建立此法，但未普遍应用。该剂型优点是粘度低，易于注射，缺点是免疫原性弱，仅诱导动物体内产生较弱的免疫应答。3)水包油包水(W/O/W)型。将W/O型疫苗经第二次分散到水相中制备。目的是降低粘度，既便于注射又具有良好的免疫原性，此剂型兼具有W/O型和O/W型的优点，效果很好。但制备技术上难度较大，疫苗稳定性差，如能克服此缺点，它是最理想的乳剂疫苗。
国内外公认的最好进口疫苗佐剂商品名为206(下称进口佐剂)通过自乳化技术制备了W/O/W型乳剂疫苗，解决了W/O/W型乳剂疫苗制备难的问题，而且具有一定的稳定性，在全球范围内得到了广泛应用。其不足之处为所制备的W/O/W型乳剂疫苗稳定性还不太令人满意。因此，通过自乳化技术制备稳定的W/O/W型乳剂具有极其重要的现实意义和市场价值。
本发明也通过自乳化技术开发了一种新的自乳化疫苗佐剂，解决了W/O/W型乳剂疫苗制备困难的难题，所制备的乳剂疫苗既便于注射又具有良好的免疫原性，而且稳定性比进口佐剂所制备的W/O/W型乳剂疫苗更好。
发明内容
本发明公开了一种新的自乳化疫苗佐剂及其制备方法，通过自乳化技术解决了W/O/W型乳剂疫苗制备困难的难题，所制备的W/O/W型乳剂疫苗稳定性比现有的佐剂所制备的W/O/W型乳剂疫苗更好。
本发明的自乳化疫苗佐剂，由以下组分及重量百分比组成油相15-98％亲水性表面活性剂1-30％亲油性表面活性剂1-30％助乳化剂0-20％各组分重量百分比均以佐剂总重量计。
优选的组分及重量百分比组成油相35-85％亲水性表面活性剂7-25％亲油性表面活性剂7-25％助乳化剂1-15％各组分重量百分比均以佐剂总重量计。
如上所述的疫苗佐剂，其中油相是矿物油、植物油、苯甲酸苄酯、油酸乙酯等中的一种或几种。
如上所述的疫苗佐剂，其中亲水性表面活性剂是HLB值在8以上的表面活性剂中的一种或几种，如聚氧乙烯壬烷基酚醚(乳化剂0P)、聚氧乙烯脂肪醇醚(乳白灵A)、辛酸葵酸聚乙二醇甘油酯(Labrasol)、吐温20、吐温40、吐温60、吐温80、吐温81、吐温85、聚氧乙烯氢化蓖麻油、普朗尼克F-68、聚氧乙烯月桂醇醇醚等。
如上所述的疫苗佐剂，其中亲油性表面活性剂是HLB值在3-8之间的表面活性剂中的一种或几种，如卵磷脂、豆磷脂、司盘85、司盘83、司盘80、司盘65、司盘60、单硬脂酸甘油酯、单油酸甘油酯、单油酸缩山梨醇酯等。
如上所述的疫苗佐剂，其中助乳化剂选自聚乙二醇200、聚乙二醇300、聚乙二醇400、乙醇、丙二醇、油酸、十八胺、十八醇等中的一种或几种。
本发明人在多次试验后发现，疫苗佐剂更优选的组分和重量组成为白油 60-85％辛酸葵酸聚乙二醇甘油酯和/或吐温5-12％单油酸缩山梨醇酯和/或司盘 10-20％
油酸3-9％各组分重量百分比均以佐剂总重量计。在此组分和重量百分比下，疫苗佐剂的稳定性更佳。
本发明疫苗佐剂的制备方法称取处方量乳化剂、助乳化剂和油相混合均匀，得到佐剂。
本发明疫苗佐剂与目前市场上供应的同类佐剂相比，不仅具有了与其同样的自乳化效果，稳定性更好，并且主要原料均为国产，成本降低了近40％，极具经济价值和市场潜力。
用本发明疫苗佐剂与进口佐剂(商品名206)以同样的方法制备油乳剂疫苗，分别同时进行稳定性试验、免疫保护试验及田间试验。
1油乳剂疫苗稳定性试验先将预热至30℃的佐剂2000ml加入至乳化机中，搅拌，在搅拌中缓慢加入预热至30℃的抗原液2000ml(抗原∶油佐剂＝1∶1，V/V)，加完后搅拌15分钟，使其均匀一致后，均质乳化5分钟，即完成乳化。然后在无菌条件下开启乳化机底阀，灌入经干烤灭菌的10000ml的血清瓶中，再从血清瓶中分装至灭菌后的100ml塑料瓶中，加灭菌胶塞，压铝盖。离心、粘度及外观检测。并分别于室温条件下存放以观察其稳定性。实验结果见表1、2、3。
表1外观、粘度及离心检测结果
表2低温(0-4℃)稳定性试验
表3室温(20-25℃)稳定性试验
2油乳剂疫苗免疫保护试验及田间试验2.1免疫保护试验用自制佐剂制成油乳剂疫苗(方法同1)，按《猪口蹄疫O型灭活疫苗(II)检验规格》进行。实验结果见表4。
表4油乳剂疫苗对猪的免疫保护试验
2.2田间试验用自制佐剂制成油乳剂疫苗(方法同1)，在两猪场进行免疫注射，观察其临床反应。注射后部分猪都有轻度临床反应体温升高，减食。第3-4天恢复正常。
具体实施例方式
实施例1按表5所列重量百分比称取处方量乳化剂、助乳化剂和油相混合均匀，得到佐剂。
表5
实施例2按表6所列重量百分比称取处方量乳化剂、助乳化剂和油相混合均匀，得到佐剂。
表6
实施例3按表7所列质量百分比称取处方量乳化剂、助乳化剂和油相混合均匀，得到佐剂。
表7
实施例4按表8所列质量百分比称取处方量乳化剂、助乳化剂和油相混合均匀，得到佐剂。
表8
权利要求
1.一种自乳化的疫苗佐剂，其特征是由以下组分及重量百分比组成油相15-98％亲水性表面活性剂1-30％亲油性表面活性剂1-30％助乳化剂0-25％各组成重量百分比均以佐剂总重量计。
2.权利要求1所述的疫苗佐剂，其特征是由以下组分及重量百分比组成油相35-85％亲水性表面活性剂6-25％亲油性表面活性剂6-25％助乳化剂3-15％各组分重量百分比均以佐剂总重量计。
3.权利要求1或2所述的疫苗佐剂，其中油相是矿物油、植物油、苯甲酸苄酯、油酸乙酯中的一种或几种。
4.权利要求1或2所述的疫苗佐剂，其中亲水性表面活性剂是HLB值在8以上的表面活性剂中的一种或几种，选自聚氧乙烯壬烷基酚醚、聚氧乙烯脂肪醇醚、辛酸葵酸聚乙二醇甘油酯、吐温20、吐温40、吐温60、吐温80、吐温81、吐温85、聚氧乙烯氢化蓖麻油、普朗尼克F-68或聚氧乙烯月桂醇醇醚。
5.权利要求1或2所述的疫苗佐剂，其中亲油性表面活性剂是HLB值在3-8之间的表面活性剂中的一种或几种，选自卵磷脂、豆磷脂、司盘85、司盘80、司盘65、司盘60、单硬脂酸甘油酯、单油酸甘油酯或单油酸缩山梨醇酯。
6.权利要求1或2所述的疫苗佐剂，其中助乳化剂选自聚乙二醇200、聚乙二醇300、聚乙二醇400、乙醇、丙二醇、油酸、十八胺、十八醇中的一种或几种。
7.权利要求1或2所述的疫苗佐剂，由以下组分及重量百分比组成白油 60-85％辛酸葵酸聚乙二醇甘油酯和/或吐温5-12％单油酸缩山梨醇酯和/或司盘 10-20％油酸 3-9％各组分重量百分比均以佐剂总重量计。
8.权利要求1至7中任一项所述的疫苗佐剂的制备方法称取处方量乳化剂、助乳化剂和油相混合均匀，即得到佐剂。
全文摘要
本发明涉及疫苗佐剂领域，具体涉及一种新的自乳化的疫苗佐剂及其制备方法。本发明佐剂由油相15－98％、亲水性表面活性剂1－30％、亲油性表面活性剂1－30％、助乳化剂0－20％组成，本发明疫苗佐剂与目前市场上供应的同类佐剂相比，不仅具有了与其同样的自乳化效果，而且稳定性更好，成本更低。
文档编号A61K9/107GK1679933SQ200510037639
公开日2005年10月12日 申请日期2005年1月7日 优先权日2005年1月7日
发明者邢为藩 申请人:邢为藩
文档序号 :
【 792190 】
技术研发人员：邢为藩
技术所有人：邢为藩
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
声 明 ：此信息收集于网络，如果你是此专利的发明人不想本网站收录此信息请联系我们，我们会在第一时间删除
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