用于预防和治疗消化系统疾病的发酵组合物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及益生菌对中药提取物生物活性的影响，特别是涉及健脾和胃中药复方提取物经肠道益生菌发酵，以提高和改善其预防和治疗消化系统疾病的方法。本发明进一步涉及麦芽、山楂、茯苓、陈皮、大枣、甘草、生姜、萝卜提取物经肠道益生菌发酵后制得的发酵组合物，以及该发酵组合物在制备用于预防和治疗消化系统疾病的食品、保健食品或药品中的应用。
【专利说明】用于预防和治疗消化系统疾病的发酵组合物
【技术领域】
[0001]本发明涉及益生菌对中药提取物生物活性的影响，特别是涉及健脾和胃中药提取物经肠道益生菌发酵，以提高和改善其预防和治疗消化系统疾病的方法。本发明进一步涉及麦芽、山楂、茯苓、陈皮、大枣、甘草、生姜、萝卜提取物经肠道益生菌发酵后制得的发酵组合物，以及该发酵组合物在制备用于预防和治疗消化系统疾病的食品、保健食品或药品中的应用。
技术背景
[0002]中草药治病的物质基础是其所含有的化学物质，这些化学物质以传统的汤剂即水提取物的形式经口进入人体之后，可表现有不同的运转途径:(1)原型化合物被机体吸收并进入循环发挥其药理作用；(2)原型化合物被机体吸收，经肝肠循环或在组织或血液内经过一系列代谢加工后发挥其药理作用；(3)化合物不被吸收，只能随粪便排出体外；(4)药物或其原型化合物在肠道正常菌群的作用下，发生某些由肠道细菌代谢酶导致的化学改变，改善了其吸收率、运转速度及生物学活性，从而在降低毒副作用的同时更有利于其药理学功能的发挥。因此，从实验室药代动力学研究和临床应用观察两方面入手，深入研究人肠道益生菌对天然药物化合物的加工与代谢转化，对于阐明传统中药的作用机理具有十分重要的意义。
[0003]自十九世纪五十年代以来，已有许多研究者利用不同的动物模型和方法，研究了肠道正常菌群对天然药物或其有效成分的转化及结构修饰。许多体内和体外研究证明，肠道正常菌群对以汤剂(水提取物)形式导入的天然化合物存在一个生物转化和结构修饰的复杂代谢加工过程，从而对天然中草药的体内吸收、运输、代谢及作用的发挥起着重要作用。例如，Dooth 等人(Dooth AN et al..，J.Biol.Chem., 223:251,1956)的早期研究发现，给小鼠经口灌服槲皮素后，尿中可检出3，4-二羟基苯乙酸等B环裂解产物，但预先给动物投用抗生素(如新霉素)，尿中则不能检出这些槲皮素代谢产物。结果提示这些裂解产物是经肠内细菌代谢转化而产生的。也已证明，真杆菌Eubacterium sp.CLH可借助其产生的β-葡糖醛酸酶，将甘草的主要成分甘草甜素转化成甘草次酸。另外，还有的实验观察到，将羊的肠内容物与豆科植物来源的异黄酮类化合物一起保温，可导致这些化合物的结构改变，即可使7-羟基-4-甲基异黄酮转化成大豆糖苷配基和epuol，同时使鹰嘴豆芽素A转化成染料木黄酮。表明羊肠道内容物中的肠道菌群具有生物转化异黄酮类化合物的能力(Niissou, A, et al., Biochem.Biophys.Acta, 148:92,1967)。
[0004]上述这些及其他许多实验均提示，已知结构或未知结构的天然药物，如通过胃肠道途径摄入体内后，必须经过肠道内菌群或其代谢产物的作用，并发生某些结构改变后才能被吸收并发挥其生物学活性。
[0005]随着现代生活节奏的加快以及工业污染的加重，胃肠疾病的发病率显著上升，成为目前严重影响人们身体健康和生活质量的一类疾病。由于胃肠疾病是人们生活中最常见、最普遍的病，因其发病广，所以人们就熟视无睹并习以为常。然而，传统医学认为:“脾胃为后天之本”，说的是胃、肠是我们人体重要的消化系器官，并主要通过其运动功能使人体摄入的食物得以消化和吸收，胃肠运动功能失调则会引发诸多肠胃不适甚至疾病，保护消化道功能正常，对人体健康十分重要。
[0006]利用中药发酵技术开发创新药物已成为当今世界药物研发的新趋势、国际医药学术界的研究热点。中药发酵技术是在继承中药炮制学发酵法的基础上，吸取微生态学研究成果，结合现代微生物工程而形成的高科技中药制药新技术。中药发酵是现代中药研究的热点，其优点可概括为:①保护中药活性成分免遭破坏，使药物的有效组分、活性物质最大限度地得以提取、利用提高中药药性，降低药物的毒副作用所优选的有益菌种本身能补充或增强原有药物的功能；④产生新的生物学活性物质；⑤为中药活性成分结构修饰提供新途径节省药材资源，保护环境；⑦是实现中药现代化、具有高科技水平的新技术，生产工艺可控，所得产物精确，制剂方便，便于与国际接轨。
[0007]现有技术中的许多实验结果均提示，益生菌和中药均对消化系统疾病有预防和治疗作用。因此本发明的主题是，利用人体的多种肠道益生菌与本发明使用的健脾和胃中药复方提取物一起发酵，以实现肠道益生菌与中药的协同作用。结果令人惊奇地发现，健脾和胃中药复方提取物经与肠道益生菌共同发酵处理后，显著的提高和改善了其预防和治疗消化系统疾病的功能。
【发明内容】
[0008]本发明涉及益生菌对中药提取物生物活性的影响，特别是涉及健脾和胃中药复方提取物经肠道益生菌发酵，以提高和改善其预防和治疗消化系统疾病的方法。本发明进一步涉及麦芽、山楂、茯苓、陈皮、大枣、甘草、生姜、萝卜组成的复方提取物经肠道益生菌发酵后，制得的发酵组合物，以及该发酵组合物在制备用于预防或治疗消化系统疾病的食品、保健食品或药品中的应用。
[0009]本发明的一个目的是提供健脾和胃中药复方提取物经益生菌发酵处理后所得到的发酵产物。本发明中，由健脾和胃中药复方提取物经益生菌发酵处理后所得到的发酵产物常常被简称为发酵组合物。
[0010]根据本发明的一个优选实施方案，中药复方选自具有健脾和胃功能的复方:其各成分的重量百份比分别是麦芽5-10 %、山楂2-8 %、茯苓3-7 %、陈皮2-4%、大枣1-4%、甘草 0.5-2%、生姜 0.5-1.5%、鲜萝卜 3-6%。
[0011]根据本发明，中药复方提取物发酵中所使用的益生菌选自双歧杆菌和乳杆菌。根据本发明的一个优选实施方案，用于发酵中药复方的双歧杆菌选自两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、青春双歧杆菌和婴儿双歧杆菌；其中所说的乳杆菌选自嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌(菌种来源于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)(中国，武汉)或中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)(中国，北京)或者从正常人的粪便或肠粘膜组织中分离得到这些细菌菌株)。
[0012]为制备发酵组合物，将包括具有适当重量比的麦芽、山楂、茯苓、陈皮、大枣、甘草、生姜、萝卜组成的中药复方经水提取，浓缩至适当浓度(药液体积ml:药材质量g =
5:1-1:1)后，再加入适量葡萄糖(0.25%-1.5% )、蛋白胨(0.1%-0.6% )、酵母粉(0.05% -0.2% )、酵母膏(0.1 % -0.4% )、无机盐(FeSO4.7H20 LOmg/lOOml、ZnSO4.7Η204.4mg/100ml、Na2SeO3.5Η20 0.024mg/100mU MgSO4.7Η20 70mg/100ml、K2HPO4.3H20100mg/100ml、KH2PO4 lOOmg/lOOml)，调整 ρΗ7.0 左右并于 115°C下灭菌 40 分钟后，得到继后用于益生菌发酵的底物。
[0013]当按上述方法制备的用于益生菌发酵的底物灭菌后，温度降至39°C左右时，接种预培养的各约0.5% (体积/体积)一种或者两种双歧杆菌的菌液,常规培养约2-6小时后，再次接种预培养的各约0.5% (体积/体积)一种或者两种乳杆菌的菌液，然后继续发酵20-42小时。或同时接种预培养的各约0.5% (体积/体积)一种或者两种双歧杆菌的菌液和预培养的各约0.5% (体积/体积)一种或者两种乳杆菌的菌液，常规发酵22-48小时。当pH降至4.2以下时结束发酵，即得益生菌发酵中药复方的发酵组合物(参见实施例I)。
[0014]本发明的再一个目的是提供本发明的发酵组合物在预防和治疗消化系统疾病中应用。可按照制药工业中已知的方法(如参见Remington’ s PharmaceuticalScience.15thed.,Mac k Publishing Company, 1980)将本发明的发酵组合物与一种或多种医药上可接受的载体或赋形剂或稀释剂按适当的比例混合，并按已知方法除菌后制成含本发明发酵组合物的制剂。
[0015]根据给药途径的不同，可按照已知的常规方法，将本发明的发酵组合物配制成适于口服给药的合剂、乳剂、酏剂、散剂、颗粒剂、片剂、丸剂、胶囊剂。根据本发明，最好是适于使用经胃肠道口服给药的合剂或乳剂。
[0016]为了制备适于口服给药的合剂、乳剂或片剂、散剂、胶囊剂、颗粒剂，可以使用蔗糖、乳糖、半乳糖等二糖，或甘露醇、山梨醇等六碳多羟基醇，以及玉米淀粉、明胶、脂质、微晶纤维素等作为载体或赋形剂。必要时，也可在这些口服制剂中加入缓冲盐、着色剂、甜味剂、香料、分散剂及表面活性剂。
[0017]根据使用目的的不同，本发明的发酵组合物制剂除含有作为基本活性成分的发酵组合物外，还可含有一种或多种具有相同、相似或不同生物学活性，并对基本活性成分表现有辅助或协同作用，但彼此又互不拮抗的天然或合成的其他药物成份或其混合物。
[0018]可将本发明的发酵组合物直接制成食品或保健食品或药物，适于患有消化系统疾病的人预防或治疗使用。
[0019]一般说来，本发明的发酵组合物的口服给药剂量可根据待治疗的病症或病理状态的性质、严重程度、病人的年龄、体重、一般健康状态，以及病人对所用药物的敏感性、耐受性和给药方式等因素，按照个体化的原则由临床医生确定。
[0020]为检测本发明的发酵组合物与未经过益生菌发酵的中药复方提取物促消化功能，本发明通过对比试验，以证明经过益生菌发酵或未经益生菌发酵的上述中药复方提取物，对小鼠小肠推进功能和对大鼠体重、摄食量及消化酶等的影响。结果表明，本发明的发酵组合物比未经发酵的中药复方提取物，上述各指标均有不同程度的提高和改善，且两者有显著性差异(参见实施例2和3)。同时为检测本发明的发酵组合物对肠道致病菌和肠道益生菌的作用，通过体外实验，以证明其对肠道菌群的影响。结果表明，本发明的发酵组合物上清对某些已知肠道致病菌具有十分显著的抑菌和杀菌作用，而对人肠道中的主要益生菌具有明显的生长促进作用(参见实施例4和5)。【具体实施方式】
[0021]实施例1:益生菌发酵健脾和胃中药复方的发酵组合物的制备
[0022]按下列重量称取各中药成分:麦芽75g、山楂50g、茯苓50g、陈皮25g、大枣25g、甘草10g、生姜9g、鲜萝卜41g。其中生姜、鲜萝卜取汁，其余六味中药加8倍水浸泡30分钟，并于100°C提取I小时，过滤，再向滤渣中加6倍量水，100°C提取I小时，过滤，并合并滤液，减压下浓缩至2: I-4: 1(即每2-4ml提取液相当于Ig药材)。加入生姜、鲜萝卜汁，定容至1000ml，即得中药复方提取物。然后再加入适量葡萄糖(1.0% )、蛋白胨(0.4% )、酵母粉(0.1% )、酵母膏(0.2% )、无机盐(FeSO4.7Η20 1.0mg/100ml,ZnSO4.7Η204.4mg/100ml、Na2SeO3.5H20 0.024mg/100ml、MgSO4.7H20 70mg/100ml、K2HPO4.3H20lOOmg/lOOml, KH2PO4lOOmg/lOOml)，调整pH7.0左右，并于115°C下灭菌40分钟。当温度降至39°C左右时，接种预培养的约0.5% (体积/体积)短双歧杆菌(AS 1.2213)的菌液，和各约0.5% (体积/体积)嗜酸乳杆菌(AS 1.1854)、植物乳杆菌(AS 1.19)的菌液，37°C发酵22小时检测pH值，PH值降至4.2以下时结束发酵，即得益生菌发酵健脾和胃中药复方提取物的发酵组合物。
[0023]本发明中使用的益生菌包括双歧杆菌和乳杆菌，其中双歧杆菌是人或乳哺动物体内最重要的生理性细菌，主要分布于小肠下部和结肠内。已知双歧杆菌对于人体的营养、生长、发育及免疫功能均具有重要作用。乳杆菌是人体内分布最为广泛的益生菌。在胃肠道中，该细菌主要分布于迥肠部。乳杆菌参予维生素，特别是B族维生素的生物合成，具有辅助食物消化、促进营养素代谢及提高宿主对乳糖的耐受性等功能。因此，本发明选用短双歧杆菌、嗜酸乳杆菌和植物乳杆菌等常见益生菌菌株，主要是基于它们在人肠道内分布的总体广泛性及其生理学活性的互补性。
[0024]可以从中国典型培养物保藏中心(CCTCC)(中国，武汉)和中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)(中国，北京)购得，或者从正常人的粪便或肠粘膜组织中分离得到这些细菌菌株。
[0025]实施例2:本发明发酵组合物与未经发酵的中药复方提取物小肠推进实验
[0026]本实施例旨在利用对小鼠小肠推进实验，举例描述按本发明方法制备发酵组合物优于未经发酵的中药复方提取物。
[0027]取实施例1制备的发酵组合物和按相似方法制备的未经益生菌发酵的中药复方提取物，分别浓缩至相同浓度，作为供试样品。
[0028]取体重18-22g的雄性小鼠40只，随机分为4组，每组10只，分别为模型对照组、未经发酵的中药复方提取物组、发酵组合物组、空白对照组。分别经口给予受试样品，对照组同样途径给水，每日I次，连续30天。试验前，各组动物禁食24小时(期间自由饮水)，试验开始前，试验组和对照组再分别给予受试样品和蒸馏水I次，给药0.5小时后，试验组和造模组分别给予蒙脱石散(0.05g/只)，空白对照组给予蒸馏水，0.5小时后各组小鼠经口给予墨汁，25分钟后立即脱颈椎处死动物，打开腹腔分离肠系膜，剪取上端自幽门、下端至回盲部的肠管，将小肠拉成直线，测量肠管长度为“小肠总长度”，从幽门至墨汁前沿为“墨汁推进长度”，计算墨汁推进率。
[0029]墨汁推进率)=墨汁推进长度(cm) /小肠总长度(cm) X 100%
[0030]实验结果如下列表I所示:[0031]表1:中药复方提取物经益生菌发酵前、后样品对小鼠小肠运动功能的影响
【权利要求】
1.健脾和胃中药提取物经肠道益生菌发酵，以提高和改善其预防和治疗消化系统疾病的方法。
2.根据权利要求1的方法，将包括具有适当重量比的中药复方经水提取，浓缩至适当浓度，加入适量碳源、氮源和无机盐，调整PH7.0左右并于灭菌后，得到继后用于益生菌发酵的底物，温度降至39°C左右时，接种预培养的一种或者两种双歧杆菌的菌液，常规培养约2-6小时后，再次接种预培养的一种或者两种乳杆菌的菌液，然后继续培养约20-42小时，或同时接种预培养的一种或者两种双歧杆菌的菌液和预培养的一种或者两种乳杆菌的菌液，常规发酵22-48小时，当pH降至4.2以下时结束发酵。
3.根据权利要求1的方法，其中所说的健脾和健胃中药复方提取物是麦芽、山楂、茯苓、陈皮、大枣、甘草、生姜、萝卜的提取物。
4.根据权利要求1的方法，其中所说的益生菌选自两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、青春双歧杆菌和婴儿双歧杆菌的双歧杆菌和选自嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的乳杆菌。
5.由根据权利要求1的健脾和胃中药复方提取物经肠道益生菌发酵产物和一种或多种医药上可接受的载体或赋形剂组成的发酵组合物制剂。
6.根据权利要求5的发酵组合物在制备用于预防和治疗消化系统疾病的药品中的应用.
7.根据权利要求5的发酵组合物在制备用于预防和治疗消化系统疾病的食品或保健食品中的应用 。
【文档编号】A61P1/00GK103446552SQ201210176435
【公开日】2013年12月18日 申请日期:2012年6月1日 优先权日:2012年6月1日
【发明者】褚新红, 牛纪江, 孙筱林, 冯淑琴, 吴炳新 申请人:吴炳新
文档序号 :
【 1239435 】
技术研发人员：褚新红,牛纪江,孙筱林,冯淑琴,吴炳新
技术所有人：吴炳新
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
声 明 ：此信息收集于网络，如果你是此专利的发明人不想本网站收录此信息请联系我们，我们会在第一时间删除
技术研发人员：褚新红,牛纪江,孙筱林,冯淑琴,吴炳新
技术所有人：吴炳新
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
声 明 ：此信息收集于网络，如果你是此专利的发明人不想本网站收录此信息请联系我们，我们会在第一时间删除