一种含贵金属的珍珠及其制备方法
0.25wt%的胰酶，在25~37°C范围内消化0.5~4小时，用200目絹网过滤去除残留的组织块，1000r/分钟离心分离出细胞，加入培养液吹散细胞沉淀，使细胞悬液密度在1 X 105~5X 107之间，得到珍珠贝的外套膜组织游离细胞悬液。由于珍珠质是由外套膜外表皮细胞分泌形成的，外套膜内表皮不参与珍珠囊的形成，因此也可以在洗涤消毒后先刮去外套膜的内表皮，再酶解消化组织块，得到主要由外表皮细胞和结缔组织细胞组成的游离细胞悬液。
[0016]2.制备一种使覆盖到珍珠核表面的组织工程支架层厚度基本均匀的模具:模具由两个中空的半球构成，每个半球的内侧面有3根与半球的平面垂直的细柱，处于彼此相隔120°的位置，细柱的作用在于支撑珠核，目的在于使珍珠核周围的空间高度一样，从而使组织工程支架厚度均匀，与半球的平面垂直可使脱模取出珍珠核时不损伤组织工程支架层，细柱的长度在0.02~2mm左右，两半球合拢后球面留有一小孔用于灌注组织工程支架液。
[0017]3.配制组织工程支架液:可以作为本发明使用的组织工程支架材料有天然的生物可降解高分子材料和人工合成的生物可降解高分子材料，天然可降解高分子材料可选择胶原蛋白、海藻酸钠、明胶、琼脂糖、壳聚糖和透明质酸等以及它们与其他材料组成的复合物，人工合成生物可降解高分子材料可选择聚乳酸(PLA)、聚乙醇酸(PGA)、聚乳酸-聚乙醇酸共聚物(PLGA)、聚己内酯(PCL)、聚乙烯醇(PVA)等它们与其他材料组成的复合物。其中优选的是胶原蛋白或其与其他材料组成的复合物，胶原蛋白具有良好的生物相容性、极低的免疫原性、良好的生物可降解性和一定的机械强度。
[0018]本发明优选的组织工程支架材料是胶原蛋白或其与其他材料组成的复合物，将支架材料溶于纯水中，配成浓度为1.0wt%~3.0wt%溶液，待支架材料完全溶解后向其中加入
2.5vol%的戊二醛溶液作为交联剂，使戊二醛终浓度为0.01vol%~0.05vol%，搅拌均匀。
[0019]1.支架制备:先在有贵金属层的珍珠核表面粘附一层多聚赖氨酸膜或胶原蛋白膜，将贵金
属层珍珠核放入模具中，然后将组织工程支架液注入模具，振荡摇匀10分钟，室温下静置2~12小时使组织工程支架材料交联，降温至4°C处理10分钟后脱模；在一 20 °C条件下放置1~6小时冷冻成型，然后放入冷冻干燥机中真空干燥6~24小时，取出，浸泡于蒸馏水中洗去残留的戊二醛；然后真空干燥去除水分。
[0020]2.使外套膜细胞均匀分布在珍珠核外表面周围:将上述处理后的珍珠核与分离的外套膜游离细胞一起在恒温培养箱中体外培养，培养液为完全培养液，采用RPM1640或M199或DMEM，加入最终体积分数为10~30vol%的血清，血清采用蚌血清或牛血清，培养温度26-37°C，培养时间1~6天，倒去培养液，然后用PBS缓冲液冲洗，去除未粘附在组织工程支架上的细胞。
[0021 ] 三、珍珠培育:将上述处理过的珍珠核按常规植核方法移植到育珠蚌的插核部位，给育珠蚌套上网孔直径比珍珠核直径小的网袋以防吐核导致珍珠核丢失，由于贵金属密度较大，根据制备的贵金属层厚度的不同，可采用常规吊养的培育方法或采用垂直吊养与平养交替轮换的养殖方法养殖育珠蚌。
[0022]本发明的有益效果:
本发明将珍珠与黄金等贵金属有机地结合为一体，创造了一种新型珍珠消费品，提高了珍珠和黄金等贵金属的价值。通过在珍珠核表面制备一个组织工程支架层，使外套膜细胞可以均匀分布到珍珠核表面，从而在珍珠核表面均匀分泌珍珠质，大大提高了正圆形优质珍珠的生产效率，从而使贵金属珍珠的生产提供了可行性。
【附图说明】
[0023]图1是本发明实施例1所述的黄金层模具I一个半球的内部结构图。
[0024]图2是实施例1所述的黄金层模具I半球的横切面图(与注胶孔所在位置垂直的面)，中间的圆表示将来放入的带有黄金层的珍珠核。
[0025]图3是实施例1所述的黄金层模具I两半球合拢后的俯视图(示注胶口)。
[0026]图4是实施例1所述的制备好的有黄金层珍珠核的剖面图。
[0027]图5是实施例1所述组织工程支架模具的形态结构图。
[0028]图6是实施例1所述组织工程支架模具的俯视图。
[0029]图7是实施例1制备的黄金珍珠的剖面图。
【具体实施方式】
[0030]以下具体实施例结合附图对本发明做进一步说明，但并不因此而限制本发明的范围。
[0031]实施例1
一、制备含贵金属层的珍珠核:
1.在市售普通贝壳珍珠核表面喷涂上一层志盛威华牌ZS-1091耐高温绝缘陶瓷涂料，室温下晾干固化48小时。
[0032]2.制备黄金层模具:所需模具由模具I和模具II组成，模具用石膏做成。模具I由两个结构一样的中空半球构成，使用时将2个半球合拢即成为一个完整的球体。每个半球的内侧面有3条南北极(以注胶孔所处位置为南极，其对侧为北极)方向排列的条状突起(以下简称棱)，其中2条棱分别位于半球两侧边缘(以下称边缘棱)，另一条棱位于半球的正中间(以下称中间棱)(图1，图2)，棱的长度为球体周长的1/2，3条棱的末端在球的南北极处相交，南极端相交处的棱切除部分形成凹口作为注胶孔；棱的高度Η为1.8 mm，中间棱2的宽度3mm左右，边缘棱3宽度为中间棱的一半。棱的作用在于支撑珍珠核，使将珍珠核放入模具后珍珠核与半球内面之间的高度一致，棱的高度Η就是黄金层的厚度；使用时，先将珍珠核放入一个半球中，然后将另一半球合拢，两个半球的边缘棱在两半球合拢后其侧面拼接在一起合为一条宽度与中间棱宽度一样的棱，两个半球合拢成一个球体，棱一端的球面是封闭的，另一端球面处留出一小孔作为注液孔1用于灌注熔化的黄金(图3)，此端对接处的棱切除部分，留出孔道使黄金液能同时灌注到模具中被棱隔开的4个空间中；模具I用于完成珍珠核外黄金层制备的第一步，得到有带凹槽的黄金层珍珠核；模具II由两个中空的半球组成，其内侧表面无突起结构，半球内径为珍珠核直径和模具I棱高度的2倍之和，两半球合拢后留有一注液孔用于灌注黄金液，利用模具II完成凹槽的填补，得到黄金层厚度相同的球形黄金层4的珍珠核5 (图4)。
[0033]3.黄金层制备:将步骤⑴处理过的珍珠核8放入模具I中(图2)，将熔化的黄金注入，冷却后脱模，取出珍珠核，放入模具II中，再注入熔化的黄金，使在模具I中第一次成型时留下的凹槽填满熔化的黄金，冷却后脱模，取出，将表面打磨光滑。
[0034]二、将珍珠蚌外套膜细胞基本均匀地分布在珍珠核黄金层的表面:
1.将外套膜细胞分散成单个存在的游离细胞:清洗蚌壳，撕取珍珠蚌的外套膜组织，切除边缘色线部分，洗涤消毒后剪成约1_2小块，采用酶消化法消化组织块，通常采用
0.25wt%的胰酶，在26左右。C范围内消化1~2小时，用200目絹网过滤去除残留的组织块，1000r/分钟离心分离出细胞，加入培养液吹散细胞沉淀，使细胞悬液密度在1 X 107左右，得到珍珠贝的外套膜组织游离细胞悬液。
[0035]2.制备一种使覆盖到珍珠核表面的组织工程支架层厚度基本均匀的模具:模具由两个中空的半球构成，每个半球的内侧面有3根与半球的平面垂直的细柱7，处于彼此相隔120°的位置(图5，图6)，细柱的作用在于支撑珠核，目的在于使珍珠核周围的空间高度一样，从而使组织工程支架厚度均匀，与半球的平面垂直可使脱模取出珍珠核时不损伤组织工程支架层，细柱的长度在1.2 _左右，两半球合拢后球面留有一小孔6用于灌注组织工程支架液。
[0036]3.配制组织工程支架液:无菌条件下用双蒸水将重组人胶原蛋白I配制成浓度为1.5wt%的溶液，待胶原蛋白完全溶解后向其中加入2.5vol%的戊二醛溶液作为交联剂，使戊二醛终浓度为0.02vol%，搅拌均匀。
[0037]4.支架制备:先将有黄金层的珍珠核高压灭菌处理，放入0.01wt%的多聚赖氨酸溶液中振荡浸泡30分钟，取出，无菌条件下晾干，使其表面粘附一层多聚赖氨酸膜。将黄金层珍珠核放入模具中，然后将胶原蛋白液注入模具，振荡摇匀10分钟，室温下静置30分钟使胶原蛋白交联，降温至4°C处理10分钟使珍珠核脱模，打开模具取出珍珠核。降温至一 20°C条件下放置2小时冷冻成型，然后放入冷冻干燥机中真空干燥6小时，真空度为12 Pa，冻干温度为一 50°C，得到有组织工程支架层的黄金珍珠核。
[0038]5.使外套膜细胞均匀分布在珍珠核外表面周围:将上述处理后的珍珠核与分离的外套膜游离细胞一起在恒温培养箱中体外培养。具体方法为:将外
文档序号 :
【 9529999 】
技术研发人员：肖义军,肖宽诚
技术所有人：福建师范大学
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
声 明 ：此信息收集于网络，如果你是此专利的发明人不想本网站收录此信息请联系我们，我们会在第一时间删除
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