一种油菜花粉酶解肽的制备方法
【技术领域】
[0001 ]本发明涉及油菜花粉酶解肽提取技术，具体地说，涉及一种油菜花粉酶解肽的制备方法。
【背景技术】
[0002]油菜，又叫油白菜，苦菜，拉丁文名:Brassica campestris L.十字花科、芸薹属植物，原产我国，其茎颜色深绿，帮如白菜，属十字花科白菜变种，花朵为黄色。农艺学上将植物中种子含油的多个物种统称油菜。目前油菜主要栽培(品种)类型为:白菜型油菜(Brassica rapa (campestris) L.)，芥菜型油菜(Brassica juncea L.)，甘蓝型油菜(Brassica napus L.)。油菜花粉含有丰富的功能性物质(包括蛋白质、维生素、微量元素、黄酮类化合物)，这些物质协同作用于机体，调节机体的多种功能，平衡体内营养，增强新陈代谢，防止毛细血管通透性的障碍。花粉还能促进内分泌腺的发育，有提高和调节内分泌腺分泌功能，因此对由内分泌功能紊乱引起的疾病起到了治疗作用。油菜花粉益肾、固本、强腰，而且含黄酮醇较高，具有抗动脉粥样硬化、治疗静脉曲张性溃疡、降低胆固醇和抗辐射的作用。增强人体综合免疫功能:花粉多糖能激活巨噬细胞的吞噬活动，提高人体抗病能力。防衰老、美容作用:蜂花粉属营养性的美容化妆品，花粉中的VE、超氧化歧化酶(S0D)、砸等成分能滋润营养肌肤，恢复皮肤的弹性和光洁。花粉中的肌醇可使白发变黑，脱发渐生，保持头发乌黑亮丽。防治脑心血管疾病:花粉中的黄酮类化合物能有效清除血管壁上脂肪的沉积，从而起软化血管和降血脂的作用。防治前列腺疾病:花粉是前列腺炎的克星，以油菜花粉、荞麦花粉效果最佳。减肥:服用蜂花粉可以吸收足够的营养，造成饱食感。同时，花粉中的卵磷脂可燃烧过剩的脂肪，达到减肥的目的。调节肠胃功能:花粉有许多杀菌成分，能杀灭大肠杆菌等，并能防治便秘。保肝护肝:花粉中的黄酮类化合物同样可防止脂肪在肝上的沉积。调节神经系统，促进睡眠。辅助治疗其他疾病:花粉对贫血、糖尿病、改善记忆力、更年期障碍等有较好效果。
[0003]《中国药典》2005版中缺乏对油菜花粉酶解肽类成分的提取办法的记载，而文献报道提取油菜花粉酶解肽方法则丰要为醇提法和水提法。
[0004]《华中农业大学》2007油菜花粉谷蛋白酶解肽的制备及其抗肿瘤活性研究，《中国农业科学院》2007油菜蜂花粉中活性肽的制备及其抗氧化性的研究论文中，优选出60°C下，50%乙醇提取三次，每次2h的提取工艺。虽然其提取温度比较低，但是提取时间长，一共需要提取6个小时，能耗大，提取效率低。
[0005]《华中农业大学》2007油菜花粉谷蛋白酶解肽的制备及其抗肿瘤活性研究，《中国农业科学院》2007油菜蜂花粉中活性肽的制备及其抗氧化性的研究中，优选出了一种醇提方法，是用5-10目药材，加10倍量80%乙醇，回流提取3次，每次lh。同样显示出是提取次数多，时间长的缺点，一共需要提取3个小时。
[0006]综合上述文献，发现所用方法提取基本完全，但同时存在消耗溶剂多，提取次数多，纯度不高，活性不稳定，污染严重的缺点，为了更能节省溶剂和能源的消耗，减少环境污染，节约原材料，有必要改进油菜花粉酶解肽的提取及制备方法。
【发明内容】
[0007]本发明的目的是克服现有技术存在的不足，提供一种节约原材料、提取效率高、纯度高、消耗溶剂少、无污染的油菜花粉酶解肽的制备方法。
[0008]为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案:
一种油菜花粉酶解肽的制备方法，包括如下步骤:将油菜花粉原料取洗干净油菜花粉，采用超微粉碎法破壁，置于植物提取罐中，加入乙醇浓度为60%，药材与溶剂的重量体积比为1:15，提取温度65°C，提取时问120min，提取液经过抽滤或离心，清液进行浓缩，二氯甲烷萃取制备后得稠膏，加入乙醇进行制备色谱分离，得到油菜花粉酶解肽。
[0009]在上述油菜花粉酶解肽的制备方法中，所述醇溶液优选为甲醇或乙醇溶液。
[0010]在上述油菜花粉酶解肽的制备方法中，所述乙醇溶液体积浓度优选为65%-75%。
[0011]在上述油菜花粉酶解肽的制备方法中，所用油菜花粉原料粗粉粒度优选为超微粉碎法破壁。分解提取效率高，温度低，所以有必要对油菜花粉进行超微粉碎法破壁，增加油菜花粉与溶剂接触的面积，提高油菜花粉酶解肽的提取率。
[0012]在上述油菜花粉酶解肽的制备方法中，油菜花粉与溶剂的重量体积比优选为I:15-1:20。
[0013]在上述油菜花粉酶解肽的制备方法中，超微粉碎法破壁。
[0014]在上述油菜花粉酶解肽的制备方法中，温度优选为60-70°C。
[0015]在上述油菜花粉酶解肽的制备方法中，提取时间优选为120-150min。
[0016]与现有技术相比，本发明具有如下有益效果:
1.该发明在提取过程中，利用超微粉碎法破壁的分解效应、机械效应及热效应等增强溶剂对油菜花粉的穿透力，有助于油菜花粉中有效成分的溶出，从而提高有效成分的提取率，节约原材料，降低提取温度，降低能耗，提高提取效率，减少对环境污染。
[0017]2.该发明的制备工艺中溶剂用量少，既节约溶剂又节约能源，降低生产成本，对环境零污染。
[0018]由于油菜花粉微波技术提取油菜花粉酶解肽在《中国药典》2005舨中缺乏含量测定项，所以参考文献报道，油菜花粉酶解肽主要肽元，并结合实验验证，确定油菜花粉酶解肽的质量指标以薯蓣肽元为对照品，采用的测定方法为分光光度法。具体方法为:取2g花粉的提取液，浓缩至干，1ml水溶解，用水饱和正丁醇萃取4次，洗涤萃取液，合并正丁醇液，浓缩至干用甲醇定容至1ml。取甲醇液0.5ml，水浴挥干，加高氯酸1ml，65°C水浴15min，冰水冷却终止反应，制得样品液。以高氯酸(分析纯)为空白，在409nm下测定吸光度。
[0019]本发明所说的油菜花粉酶解肽得率=(总酶解肽重量/投入的花粉重量)X100%
油菜花粉酶解肽提取率=(油菜花粉酶解肽提取物中的总酶解肽含量X酶解肽重量/投入的油菜花粉酶解肽含量X投入的花粉重量)X 100%
下面通过具体实施例进一步阐述本发明的技术方案。
【具体实施方式】
[0020]以下实施例所用的油菜花粉酶解肽含量为3.06%0。
[0021]如下乙醇百分比均为体积百分比。
[0022]实施例1提取工艺条件的选择
(I)超微粉碎法破壁分解的时间对油菜花粉酶解肽提取效果的影响实验方法:取油菜花粉500g纳米级超微粉碎法破壁，置于植物提取罐中，加入60%乙醇作为提取溶剂，花粉与溶剂的重量体积比为1:15，提取温度65°C，选择不同的分解时间提取一次，分解提取后的提取液经过抽滤或离心，清液进行浓缩，二氯甲烷萃取制备后得稠膏，干燥，即得油菜花粉提取物。考察不同提取时间下油菜花粉酶解肽的提取效果。结果如表I所示:
表I
时间提取率(％)
10h24.2
14h30.1
18h45.6
20h73.5
24h90.3
实验结果显示延长分解时间能增加酶解肽的提取率，24h时含量就已经达到最高。所以选取24h作为最佳提取时间。
[0023](2)提取温度对油菜花粉酶解肽提取效果的影响
实验方法:取500g油菜花粉原料超微粉碎法破壁粉末，置于植物提取罐中，分解，加入60%乙醇作为提取溶剂，油菜花粉与溶剂的重量体积比为1:15，选择不同的提取温度提取一次，超声提取后的提取液经过抽滤或离心，清液进行浓缩，二氯甲烷萃取制备后得稠膏，干燥，即得油菜花粉提取物。考察不同提取时间下油菜花粉酶解肽的提取效果。结果如表2所示:
表2
温度提取率(％)
20°C58.5
30°C60.9
文档序号 :
【 9903523 】
技术研发人员：张军,徐晓云,顾红涛,和平,侯秋飞
技术所有人：襄阳利高乐生物化学科技有限公司
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
声 明 ：此信息收集于网络，如果你是此专利的发明人不想本网站收录此信息请联系我们，我们会在第一时间删除
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