一种油菜花粉酶解肽的制备方法
50°C84.7
60°C87.8
实验结果显示，随着提取温度的升高，油菜花粉酶解肽的提取率也不断提高，综合考虑成本，故选取60°C作为最佳超声提取温度。
[0024](3)提取溶剂对油菜花粉酶解肽提取效果的影响
实验方法:取500g油菜花粉超微粉碎法破壁粉末，置于植物提取罐中，加入60%乙醇作为提取溶剂，油菜花粉与溶剂的重量体积比为1:15，选择不同的提取溶剂提取一次，超声提取后的提取液经过抽滤或离心，清液进行浓缩，二氯甲烷萃取制备后得油菜花粉提取物稠膏，干燥，即得油菜花粉酶解肽提取物。考察不同提取时间下油菜花粉酶解肽的提取效果。结果如表3所示:
表3 溶剂提取率(％)
7X55.6
30% 乙醇 63.740% 乙醇 70.950% 乙醇 76.560% 乙醇 87.470% 乙醇 88.3甲醇78.4
实验结果显示，选择60 %乙醇、70 %乙醇和甲醇作为提取溶剂都具有较好的提取效果。但甲醇毒性较大，不利于工业化生产，而50%乙醇提取出杂质相对较多，过滤比较困难，所以综合生产成本等因素，选取60%乙醇作为提取溶剂。
[0025](4)提取溶剂体积对油菜花粉酶解肽提取效果的影响
实验方法:取500g油菜花粉原料纳米级粉末，置于植物提取罐中，加入60%乙醇作为提取溶剂，花粉与溶剂的重量体积比为1:15，选择不同的提取溶剂比例提取一次，超声提取后的提取液经过抽滤或离心，清液进行浓缩，二氯甲烷萃取制备后得稠膏，干燥，即得油菜花粉酶解肽提取物。考察不同提取时间下油菜花粉酶解肽的提取效果。结果如表4所示:
表4
溶剂提取率(％)
10 倍 88.6 15 倍 90.7
实验结果显示，使用油菜花粉与溶剂的重量体积比1:15的时候，提取率能得到较大的提高。因此选取I: 15作为最佳油菜花粉与溶剂的重量体积比。
[0026](5)油菜花粉目数对油菜花粉酶解肽提取效果的影响
实验方法:取500g油菜花粉超微粉碎法破壁粉末，置于植物提取罐中，加入60%乙醇作为提取溶剂，油菜花粉与溶剂的重量体积比为1:15，选择不同的提取细度提取一次，超声提取后的提取液经过抽滤或离心，清液进行浓缩，二氯甲烷萃取制备后得油菜花粉提取物稠膏，干燥，即得油菜花粉酶解肽提取物。考察不同提取时间下油菜花粉酶解肽的提取效果。结果如表5所不:
表5
超微粉碎法破壁级水磨提取率(％)
超微粉碎法破壁级无水90.8 超微粉碎法破壁级含水99.5
实验结果显示，利用经过超微粉碎法破壁级含水的油菜花粉进行提取比纳米级无水的提取率更高，所以选定超微粉碎法破壁含水作为最佳工艺。
[0027]最后，归纳超微粉碎法破壁法提取最佳提取工艺为:取超微粉碎法破壁的油菜花粉原料，置于植物提取罐中，加入乙醇浓度为60%，油菜花粉与溶剂的重量体积比为1:15，提取温度60°C，提取时间120min，提取后的提取液经过抽滤或离心，清液进行浓缩，二氯甲烷萃取制备后得稠膏，加入乙醇进行C18-制备色谱分离得到油菜花粉酶解肽。
[0028]实施例2 取500g取超微粉碎法破壁的油菜花粉原料，置于植物提取罐中，加入乙醇浓度为60%，油菜花粉与溶剂的重量体积比为1:15，提取温度60°C，提取时间120min，提取后的提取液经过抽滤或离心，清液进行浓缩，二氯甲烷萃取制备后得油菜花粉提取物稠膏，加入乙醇进行C18-制备色谱分离得到油菜花粉酶解肽稠膏，干燥，即得油菜花粉酶解肽。结果:干膏得率为8.5%，含量25.0%，提取率99.7%。
[0029]实施例3
同实施例2所示，不同的是:实施例2中药材与溶剂的重量体积比为1:20，而实施例3中药材与溶剂的重量体积比为1:1O。结果:干膏得率为8.9%,含量16.7%,提取率91.7%。
[0030]实施例4
同实施例3所示，不同的是:实施例3油菜花粉粉碎达纳米级，而实施例4油菜花粉粉碎达纳米级。结果:干膏得率为8.9%,含量15.7%,提取率85.8%。
[0031]实施例5
同实施例4所不，不同的是:实施例4中乙醇浓度为60%，提取时间为24h，而实施例5中乙醇浓度为50 %，提取时间为12h ο结果:干膏得率为8.3%,含量15.1%,提取率79.6 %。
[0032]实施例6
同实施例4所示，不同的是:实施例4中提取时间为12h，而实施例6中提取时间为8h。结果:干膏得率为9.5%，含量11.7%，提取率40.1%。
[0033]实施例7
取500g取超微粉碎法破壁的油菜花粉，置于植物提取罐中，加入乙醇浓度为60%，油菜花粉与溶剂的重量体积比为1:10，提取温度60°C，提取时间40min，提取后的提取液经过抽滤或离心，清液进行浓缩，二氯甲烷萃取制备后得油菜花粉提取物稠膏，加入乙醇进行C18-制备色谱分离得到油菜花粉酶解肽稠膏，干燥，即得油菜花粉酶解肽。结果:干膏得率为9.3%，含量18.7%，提取率73.4% ,Cl8-制备色谱后纯度达95%以上。
[0034]实施例8
同实施例3所示，不同的是:实施例3使用植物提取一次，实施例8使用水浴热回流提取3次，每次60min。结果:干膏得率为9.4%，含量15.7%。
[0035]由以上实施例可知，超微粉碎法破壁分解提取油菜花粉，其最优条件为:超微粉碎法破壁的油菜花粉原料，置于植物提取罐中，加入乙醇浓度为60-80%，油菜花粉与溶剂的重量体积比为I: 10-1: 18，60-75°C，提取时间60-150min，提取液经过抽滤或离心，清液进行浓缩，二氯甲烷萃取制备后得稠膏，加入乙醇进行C18-制备色谱分离即得95%以上油菜花粉酶解肽。而常规回流提取则需要在较高提取温度下长时间和多次数地进行提取，才能达到本工艺一次提取的效果。因此，超微粉碎法破壁分解提取具有减少提取溶剂用量，降低提取温度，节约原材料，减少环境污染，不破坏药物的活性成分，提取油菜花粉酶解肽纯度高的特点。
【主权项】
1.一种油菜花粉酶解肽的制备方法，其特征在于包括如下步骤:取洗干净油菜花粉原料，采用超微粉碎法破壁，置于植物提取罐中，加入乙醇浓度为60%，花粉与溶剂的重量体积比为1:15，提取温度65°C，提取时间120min，提取液经过抽滤或离心，清液进行浓缩，二氯甲烷萃取制备后得稠膏，加入乙醇进行制备色谱分离，得到油菜花粉酶解肽。
【专利摘要】本发明公开了一种油菜花粉酶解肽采用超微粉碎法破壁，操作简单，无水添加，破壁率高，免除溶剂操作，有利于后序活性成分提取的制备方法。它是将油菜花粉去污洗干净、滤水，然后按一定比例加入低沸点的醇及其他有机溶剂进行回流三次萃取。采用特制的真空、微波、低温干燥设备相结合的方法对油菜花粉提取物进行干燥，保持相关活性成分不变，又能降低干燥温度，加快干燥速度。采用大孔吸附树脂C18反相硅胶柱层析-特制备色谱联用技术分离纯化，制得油菜花粉提取物的含量为90%的产品。进一步用我公司制备一种特定溶剂，进行重结晶提纯油菜花粉提取物的纯度达95%以上。通过正交试验确定油菜花粉提取化合物提取、萃取、干燥、纯化分离、重结晶的最佳工艺。本发明的制备方法具有工艺操作比较稳定，提取物收率比较高，纯度高，对环境无污染，适合现代化工业自动化生产的要求。
【IPC分类】C07K1/16, C07K1/14
【公开号】CN105669828
【申请号】CN201610090425
【发明人】张军, 徐晓云, 顾红涛, 和平, 侯秋飞
【申请人】襄阳利高乐生物化学科技有限公司
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年2月18日
文档序号 :
【 9903523 】
技术研发人员：张军,徐晓云,顾红涛,和平,侯秋飞
技术所有人：襄阳利高乐生物化学科技有限公司
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
声 明 ：此信息收集于网络，如果你是此专利的发明人不想本网站收录此信息请联系我们，我们会在第一时间删除
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