一种保健食品的制作方法
[0027]1.4相关仪器与试剂
1.4.1仪器。打孔器、多功能酶标仪、二氧化碳培养箱、SG-603生物安全柜、T1000型电子天平、JA2003型电子天平、JJ-100型电子天平。
[0028]1.4.2试剂。豚鼠血清、印度墨汁、异丙醇、都氏试剂、SA缓冲液、YAC-1细胞、LDH基质液、DNFB、SRBC、RPMI1640、Co-nA、MTT。
[0029]1.5数据统计用SPSS10.0软件对各试验原始数据进行方差齐性检验，满足方差齐要求的数据资料，使用单因素方差分析方法中多个试验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理；对非正态分布或方差不齐的数据资料进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换所得的数据进行统计处理。
[0030]1.6结果判定在细胞免疫功能(ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化、DNFB诱导小鼠DTH)、体液免疫功能(抗体生成细胞检测、血清溶血素测定)、单核-巨噬细胞功能(小鼠碳廓清、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞)、NK细胞活性4个方面任2个方面结果阳性，可判定该受试样品具有增强免疫力作用。其中细胞免疫功能测定、体液免疫功能测定、单核-巨噬细胞功能测定每个项目中的2个试验结果均为阳性，或任一个试验的2个剂量组结果阳性，可判定该项功能测定结果阳性。NK细胞活性测定试验的一个以上剂量组结果阳性，可判定NK细胞活性结果阳性。
[0031]2结果与分析
2.1细胞免疫功能试验
2.1.1本发明产品对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化的影响。经口给予小鼠不同剂量的本发明产品30 d后，进行ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验(MTT法)，计算吸光度的差值(加ConA孔与不加ConA孔)，并对其进行方差齐性检验，满足方差齐性要求，用单因素方差分析方法中多个试验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。1.60(kg.bw.d)组吸光度的差值(加ConA孔与不加ConA孔)高于Og/ (kg.bw.d)组，差异具有统计学意义(P〈0.05)。
[0032]2.1.2本发明产品对DNFB诱导小鼠DTH的影响。经口给予小鼠不同剂量的本发明产品一个月后，用耳肿胀法进行DNFB诱导小鼠DTH试验，计算耳壳增重，并进行方差齐性检验，满足方差齐性要求后用单因素方差分析方法中多个试验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。0.53、1.60 (kg.bw.d)组耳壳增重高于Og/ (kg.bw.d)组，差异有统计学意义(P〈0.05) ο
[0033]2.2体外免疫功能试验
2.2.1本发明产品对小鼠抗体生成细胞的影响。经口给予小鼠不同剂量的本发明产品30 d后，用Jerne改良玻片法进行小鼠抗体生成细胞试验，计算溶血空斑数，并进行方差齐性检验，满足方差齐性要求后用单因素方差分析方法中多个试验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。1.60 g / (kg.bw.d)组溶血空斑数高于O g /(kg.bw.d)组，差异有统计学意义(Ρ〈0.05) ο
[0034]2.2.2本发明产品对小鼠血清半数溶血值的影响。经口给予小鼠不同剂量的本发明产品一个月后，用半数溶血值法测定小鼠的血清半数溶血值，并进行方差齐性检验，不满足方差齐性要求，用秩和检验进行统计处理。0.27,0.53、1.60 g / (kg.bw.d)组小鼠血清半数溶血值(HC5。)与O g / (kg.bw.d)组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。
[0035]2.3单核-巨噬细胞功能试验
2.3.1本发明产品对小鼠碳廓清能力的影响。经口给予小鼠不同剂量的本发明产品一个月后，进行小鼠碳廓清试验，计算吞噬指数a，并进行方差齐性检验，满足方差齐性要求，用单因素方差分析方法中多个试验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。1.60 g / (kg.bw.d)组小鼠吞■指数高于Og/ (kg.bw.d)组，差异有统计学意义(Ρ〈0.05) ο
[0036]2.3.2本发明产品对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的影响。经口给予小鼠不同剂量的本发明产品30d后，用半体内法进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验，计算吞噬指数及吞噬百分率，并将吞噬百分率经sin 1 P172 (P为吞噬百分率，用小数表示)转化后进行方差齐性检验，满足方差齐性要求后，用单因素方差分析方法中多个试验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。1.60 g / (kg-bwd)组吞噬百分率及吞噬指数高于Og/ (kg.bw.d)组，差异有统计学意义(P〈0.05)。
[0037]2.4 NK细胞活性测定经口给予小鼠不同剂量的本发明产品30 d后，用乳酸脱氢酶测定法进行小鼠NK细胞活性测定，将其经sin 1 P172 (P为NK细胞活性，用小数表示)转化后进行方差齐性检验，满足方差齐性要求，用单因素方差分析方法中多个试验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。0.27,0.53、1.60 (kg *bw.(!)组NK细胞活性与O (kg.bw.d)组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。
[0038]3 小结
本发明产品以0.27、0.53、1.60 g / (kg-bwd)连续给样30 d，按《保健食品检验与评价技术规范》要求，分别对不同剂量组的小鼠进行细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能、NK细胞活性的测定。结果发现，本发明产品增强免疫力功能之细胞免疫功能试验为阳性、本发明产品增强免疫力功能之体液免疫功能试验为阴性、本发明产品增强免疫力功能之单核-巨噬细胞功能试验为阳性、本发明产品增强免疫力功能之NK细胞活性测定试验为阴性。
[0039]根据《保健食品检验与评价技术规范》之增强免疫力功能试验的结果判定，在细胞免疫功能(ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化、DNFB诱导小鼠DTH)、体液免疫功能(抗体生成细胞检测、血清溶血素测定)、单核-巨噬细胞功能(小鼠碳廓清、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞)、NK细胞活性4个方面任2个方面结果阳性，可判定该受试样品具有增强免疫力作用。在该试验条件下本发明产品具有增强免疫力功能。
[0040]以上对本发明进行了详细介绍，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行更动、润饰或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应属于本发明的权利要求保护范围当中。
【主权项】
1.一种保健食品，其特征在于它由下述重量份数的原料共同混合加工制成:蝙蝠蛾拟青霉菌粉2-6份、灵芝1-3份、纳豆冻干粉8-16份、茯苓0.2-0.5份、黄芪0.4-1份、牛膝0.3-0.6份、当归1-3份、铁皮石斛0.2-0.4份、西洋参3_8份、丹参0.5-1份、三七1_2份。2.一种保健食品的制备方法，包括以下步骤:将灵芝、茯苓、黄芪、牛膝、当归、铁皮石斛、西洋参、丹参、三七按重量比例混合，然后按照常规水提方式提取两次，合并两次提取液后浓缩喷雾干燥，再与配方量的蝙蝠蛾拟青霉菌粉、纳豆冻干粉混合，加入辅料经相应工艺制得颗粒剂、片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂。
【专利摘要】本发明公开一种保健食品，其含有蝙蝠蛾拟青霉菌粉、灵芝、纳豆冻干粉、茯苓、黄芪、牛膝、当归、铁皮石斛、西洋参、丹参、三七。本发明所选取的原料配比科学合理，经人体试食试验证明，具有良好的提高免疫力、增强体质、辅助降血脂的作用。
【IPC分类】A23L1/29
【公开号】CN105124578
【申请号】CN201510558745
【发明人】王业煌
【申请人】威海御膳坊生物科技有限公司
【公开日】2015年12月9日
【申请日】2015年9月6日
文档序号 :
【 9404149 】
技术研发人员：王业煌
技术所有人：威海御膳坊生物科技有限公司
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
声 明 ：此信息收集于网络，如果你是此专利的发明人不想本网站收录此信息请联系我们，我们会在第一时间删除
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