利用鱼类下脚料和固定化酶制备缓释性海参饵料的方法与流程

1.利用鱼类下脚料和固定化酶制备缓释性海参饵料的方法，其特征在于：其经过下列工艺步骤：

（a）鱼类下脚料发酵处理

（a1）发酵种子液的培养

在DAE培养基中接入W2菌种，控制温度20～25℃，在150～180r/min条件下，培养2～3d，得种子菌液，所述的种子菌液OD600为1.0～1.2；其中，所述的DAE培养基的配方为：蛋白胨0.4～0.8g，酵母膏0.05～0.2g，磷酸铁0.01～0.02g，海水90～100ml；所述的W2菌种为鱼肠道中分离筛选得到的产蛋白酶菌株，该W2菌种与所述的DAE培养基的接种比例为1:300～500；

（a2）鱼类下脚料发酵液的制备

选取鱼下脚料为原料，研磨至肉糜状；称量肉糜状鱼类下脚料放入步骤(a1)制得的种子菌液中，控制温度20～25℃，在150～180r/min条件下，培养2～3d，取发酵液，得鱼类下脚料发酵液；其中，所述的肉糜状鱼类下脚料与种子菌液的料液比为1:20～25；

（b）固定化酶的制备

（b1）载体制备

称取壳聚糖溶解于浓度为20～30%的盐酸溶液中，配成壳聚糖溶液；然后将制得的壳聚糖溶液注射到含15%的氢氧化钠和30%甲醇混合溶液中，凝结成中空球形壳聚糖；其中，所述的壳聚糖与盐酸溶液的料液比为1:3～5，所述的壳聚糖的脱乙酰度为80%～85%；

（b2）载体活化

将步骤（b1）制得的中空球形壳聚糖放入浓度为4～8%的戊二醛水溶液中，于室温下搅拌反应4～6h，然后4℃静置过夜，去上清液后用水清洗2～3次，去除残余的戊二醛，得戊二醛活化处理的中空球形壳聚糖；其中，所述的中空球形壳聚糖与戊二醛水溶液的料液比为1:2～3；

（b3）酶的包埋

将步骤（b2）制得的戊二醛活化处理的中空球形壳聚糖分别加入不同pH 值缓冲液配置的中性蛋白酶、碱性蛋白酶和酸性蛋白酶制剂中，室温下搅拌反应2～3h ，于4℃静置过夜，用水清洗去除游离酶，即得固定化的中性蛋白酶、碱性蛋白酶和酸性蛋白酶；其中，所述的中性蛋白酶的缓冲液pH 值为6.8～7.5；所述的碱性蛋白酶的缓冲液pH 值为8.5～10.5；所述的酸性蛋白酶的缓冲液pH 值为4.0～4.5；

（c）投放

将步骤（b3）制得的固定化的中性蛋白酶、碱性蛋白酶和酸性蛋白酶与步骤（a2）制得的鱼类下脚料发酵液按料液比为1:50～100投入海参养殖水域中。