用于治疗血液肿瘤的抗IL-3Rα抗体的制作方法
[0024]IL-3是已知作为IL-3Ra配体的唯一配体。IL-3是一种造血因子，其已知加速下 列细胞的集落形成：红细胞，巨核细胞，中性粒细胞，嗜酸性粒细胞，嗜碱性粒细胞，肥大细 胞和单核系统细胞。已知IL-3也刺激具有多能性的前体细胞，但是宁可将IL-3说成是加 速具有自主复制能力的未成熟干细胞的分化，而是加速定向前体细胞的分化。
[0025] 已知IL-3Ra通过与0链形成异源二聚体，从而通过丝氨酸/苏氨酸磷酸化途径 将IL-3信号传导到细胞中，而与骨髓细胞的生长和分化有关。已知IL-3Ra表达在造血祖 细胞中的粒细胞-巨噬细胞祖细胞（GMP)或髓系共同祖细胞（CMP)中，并通过IL-3信号传 导诱导生长和分化成中性粒细胞和巨噬细胞系统。另一方面，已报道存在于CMP下游中的 巨核细胞-红细胞类祖细胞（MEP)与也存在于下游中的GMP不同，不表达IL-3Ra。
[0026] 关于AML干细胞，Bonnet和Dick报道了AML干细胞存在于⑶34阳性⑶38阴性级 分中（非专利参考文献13)。此外，通过与正常干细胞的相同级分（CD34阳性CD38阴性） 进行比较，Jordan等已经发现IL-3Ra在AML干细胞中高表达（非专利参考文献14)。在 随后的多篇报告中也已报道了IL-3Rci不仅作为AML干细胞而且作为白血病干细胞的标志 物的高潜力（非专利参考文献15和16)。在癌症包括白血病的治疗中，重要的是尽可能多 地只移除癌症细胞而不损伤正常细胞，并且据认为，IL-3Rci在正常干细胞与白血病干细胞 之间的这种表达差异，可用于靶向白血病干细胞的治疗。
[0027] 关于与IL-3Ra形成异源二聚体的IL-3RP，没有报告表明IL-3RP在白血病干细 胞中高表达，并且在其中对白血病干细胞和正常干细胞中mRNA的表达进行比较的微阵列 的情况下，事实上IL-3R3未被鉴定为在白血病干细胞中表达被增加的分子（非专利参考 文献17)。
[0028] 关于与IL-3Ra形成异源二聚体的IL-3RP，没有报告表明IL-3RP在白血病干细 胞中高表达，并且在其中对白血病干细胞和正常干细胞中mRNA的表达进行比较的微阵列 的情况下，事实上IL-3R3未被鉴定为在白血病干细胞中表达增加的分子（非专利参考文 献 18)。
[0029] 长时间以来，已知道存在依赖于IL-3的白血病细胞，并且老的研究聚焦于占白血 病细胞的大多数的母细胞。根据关于白血病干细胞的最新研究，据说白血病干细胞通过尽 可能详尽地抑制其生长获得了抗肿瘤药剂抗性。此外，据认为IL-3反应性母细胞具有高增 殖能力，因此推测这种细胞在使用抗肿瘤药剂的普通治疗中是有效的。
[0030] 作为靶向IL-3R受体的药剂的候选物，长时间以来IL-3本身被给药于造血不足的 患者，但是它没有因此变成药物。其中将白喉毒素添加到IL-3上的融合蛋白的临床试验 正在进行之中，其目的在于将白血病作为靶疾病。对于IL-3和白喉毒素-IL-3融合物来 说，它们不适合作为药剂靶向其中IL-3Ra的表达特异性增加的细胞，因为IL-3不是强烈 地结合单独的IL-3Ra蛋白，而是强烈结合IL-3Ra和P的异源蛋白，这是由IL-3的性 质而决定的。另一方面，作为靶向IL-3Ra的药剂的候选物，已经报道了IL-3Ra人类小鼠 嵌合抗体7G3的一期结果（非专利文献19)。因为7G3嵌合抗体利用IL-3信号传导的阻 断目的作为AML疗法的机制，它不是旨在除去IL-3Ra阳性细胞的药剂。此外，尽管已知 一些其他的IL-3Ra抗体（9F5(BectonDickinson)、6H6(SANTACRUZBI0TECHN0L0GY)和 AC145 (Miltenyi-Biotech))，但它们不具有除去高表达IL-3Ra的细胞的能力。
[0031] 引用文献名单
[0032] 专利文献
[0033] 专利文献I:EP公开的专利申请120694
[0034] 专利文献2 :EP公开的专利申请No. 125023
[0035] 专利文献3 :GB专利申请No.GB2188638A
[0036] 专利文献4:美国专利No. 5, 585, 089
[0037] 非专利文献
[0038]非专利文献I:0sawaM等，Science. 273:242-5 (1996)
[0039]非专利文献 2:GoodellMA等，JExpMed. 183:1797-806(1996)
[0040]非专利文献 3:YamazakiS等，EMB0J. 25:3515_23(2〇〇 6)
[0041]非专利文献 4:IshikawaF等，NatBiotechnol. 25:1315-21. (2007)
[0042]非专利文献 5:BaoS等，Nature. 444:756-60(2006)
[0043]非专利文献 6:Schiff等，Cane.Res.，45, 879-885 (1985)
[0044]非专利文献 7Jruggemann等，J.Exp.Med.，170:2153-2157(1989)
[0045]非专利文献 8:Riechmann等，Nature, 332:323-327 (1988)
[0046]非专利文献 9:IshidaI等，CloningStemCells. 4:91-102 (2002)
[0047]非专利文献 10:Wu等，JMolBiol19:151-62(1999)
[0048]非专利文献 11:Sun等，Blood, 87:83(1996)
[0049]非专利文献 12:Chen等，JBiolChem, 284:5763(2009)
[0050]非专利文献 13:Bonnet等，NatMed, 1997 ;3:730
[0051]非专利文献 14:Jordan等，Leukemia, 2000;14:1777
[0052]非专利文献 15 :Haematologica, 2001 ;86:1261
[0053]非专利文献 16 :LeukLymphoma, 2006 ;47:207
[0054]非专利文献 17:Majeti等，ProcNatlAcadSciUSA. 2009;106:3396
[0055]非专利文献I8:Majeti等，ProcNatlAcadSciUSA. 1〇6:3396 (2OO9)
[0056]非专利文献 19 :Blood, 2008112(11):摘要 2956
[0057] 发明概沭
[0058] 技术问题
[0059] 本发明的目的是提供能够单独移除白血病干细胞并且也能几乎不表现出对正 常细胞的副作用（显示出较少副作用）的治疗药剂。具体来说，本发明提供了针对人类 IL-3RCI链的抗体，其不抑制IL-3信号传导并与人类IL-3RCI链的B结构域结合，但不与C 结构域结合；包含抗体的组合物；以及包含抗体的治疗方法或检测方法。
[0060] 解决问题的方案
[0061] 本发明涉及下列（1)至（9)。
[0062] (1) 一种针对人类IL-3Ra链的抗体，所述抗体不抑制IL-3信号传导并与人类 IL-3Ra链的B结构域结合，但是与C结构域结合。
[0063] (2)上述（1)中描述的抗体，其进一步具有高抗体依赖性细胞毒性（ADCC)。
[0064] (3)上述⑴或⑵中描述的抗体，其中通过使用用IL-2培养的PBMC的 Colon-26/h⑶123ADCC测定法，高抗体依赖性细胞毒性（ADCC)在0? 01iig/ml的抗体浓度下 显示出10%的特异的裂解率。
[0065] (4)上述（1)至（3)任一项中描述的抗体，其包含选自下列（a)至（e)的重链⑶R 和轻链⑶R的氨基酸序列：
[0066] (a)重链的⑶R1至3分别为SEQIDNO: 113至115的氨基酸序列，轻链的⑶R1 至3分别为SEQIDNO: 131至133的氨基酸序列，
[0067] (b)重链的⑶R1至3分别为SEQIDNO: 116至118的氨基酸序列，轻链的⑶R1 至3分别为SEQIDNO: 134至136的氨基酸序列，
[0068] (c)重链的⑶R1至3分别为SEQIDNO: 119至121的氨基酸序列，轻链的⑶R1 至3分别为SEQIDNO: 137至139的氨基酸序列，
[0069] (d)重链的⑶R1至3分别为SEQIDNO: 122至124的氨基酸序列，轻
文档序号 :
【 8230504 】
技术研发人员：俵知纪,高柳晋一郎,稻垣好昌
技术所有人：协和发酵麒麟株式会社
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
声 明 ：此信息收集于网络，如果你是此专利的发明人不想本网站收录此信息请联系我们，我们会在第一时间删除
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