用于治疗血液肿瘤的抗IL-3Rα抗体的制作方法
[0070] (e)重链的CDR1至3分别为SEQIDNO: 125至127的氨基酸序列，轻链的CDR1 至3分别为SEQIDNO: 143至145的氨基酸序列。
[0071] (5)上述⑴至⑷任一项中描述的抗体，其包含选自下列（a)至（f)的重链可变 区和轻链可变区：
[0072] (a)包含SEQIDNO: 53的氨基酸序列中从20位谷氨酰胺（Q)至139位丝氨酸（S) 的氨基酸序列的重链可变区，以及包含SEQIDN0:55的氨基酸序列中从23位缬氨酸（V) 至129位赖氨酸（K)的氨基酸序列的轻链可变区；
[0073] (b)包含SEQIDNO: 57的氨基酸序列中从20位谷氨酰胺（Q)至139位丝氨酸（S) 的氨基酸序列的重链可变区，以及包含SEQIDN0:59的氨基酸序列中从23位缬氨酸（V) 至129位赖氨酸（K)的氨基酸序列的轻链可变区；
[0074] (c)包含SEQIDN0:61的氨基酸序列中从20位谷氨酰胺（Q)至139位丝氨酸（S) 的氨基酸序列的重链可变区，以及包含SEQIDN0:63的氨基酸序列中从23位天冬氨酸（D) 至129位赖氨酸（K)的氨基酸序列的轻链可变区；
[0075] (d)包含SEQIDN0:65的氨基酸序列中从20位谷氨酰胺（Q)至139位丝氨酸（S) 的氨基酸序列的重链可变区，以及包含SEQIDN0:67的氨基酸序列中从23位天冬氨酸（D) 至129位赖氨酸（K)的氨基酸序列的轻链可变区；
[0076] (e)包含SEQIDN0:69的氨基酸序列中从20位谷氨酰胺（Q)至138位丝氨酸（S) 的氨基酸序列的重链可变区，以及包含SEQIDN0:71的氨基酸序列中从23位天冬氨酸（D) 至129位赖氨酸（K)的氨基酸序列的轻链可变区；以及
[0077] (f)重链可变区和/或轻链可变区，其包含在上述（a)至（e)所显示的重链可变区 和/或轻链可变区中缺失、取代、添加或插入1至3个氨基酸残基的氨基酸序列。
[0078] (6) -种用于预防或治疗血液肿瘤的组合物，在所述血液肿瘤中在对象的骨髓或 外周血中发现了表达IL-3Ra的细胞，所述组合物包含（1)至（5)任一项中描述的IL-3Ra 抗体作为活性成分。
[0079] (7) -种用于治疗血液肿瘤的方法，在所述血液肿瘤中在骨髓或外周血中发现了 表达IL-3Ra的细胞，所述方法包含向对象给药包含（1)至（5)任一项中描述的IL-3Ra 抗体作为活性成分的组合物。
[0080] (8) -种用于检测血液肿瘤的组合物，在所述血液肿瘤中在来自对象的生物样品 的骨髓或外周血中发现了表达IL-3Ra的细胞，所述组合物包含（1)至（5)任一项中描述 的IL-3Ra抗体。
[0081] (9) (1)至（5)任一项中描述的组合物或方法，其中上面提到的血液肿瘤是急性骨 髓性白血病（AML)。
[0082] 本发明的有益效果
[0083] 本发明能够提供针对人类IL-3RCI链的抗体，其不抑制IL-3信号传导并与人类 IL-3Ra链的B结构域结合，但不结合C结构域；包含所述抗体的组合物以及使用所述抗体 的治疗方法或检测方法。
[0084]附图简沭
[0085][图1]和[图2]图1和2是使用标记的抗IL-3Ra抗体对表达IL_3Ra/ GM-CSFRa嵌合蛋白的细胞进行的流式细胞术分析结果。
[0086][图3]图3是使用标记的抗IL-3Ra抗体对表达IL-3Ra/GM-CSFRa嵌合蛋白的 细胞进行的流式细胞术分析的结果。
[0087][图4]图4是图表，其中在人类IL-3Ra分子的A和B结构域的核苷酸和氨基酸 序列中，排列在分子外部的区域1至7被GM-CSFRa序列取代的区域部分用虚线显示。
[0088][图5]图5是用于检测IL-3信号传导的阻断活性的细胞生长试验的结果。纵坐 标表示细胞生长抑制率（％ )，横坐标表示各种IL-3Rci抗体名称。
[0089] [图6]图6是用于检测IL-3信号传导的阻断活性的集落测定试验。GM、E和GEMM 分别显示了使用粒细胞/巨噬细胞系统、红细胞类系统集落和混合集落的结果。
[0090] [图7]图7是在带肿瘤模型中检测各种人类抗体的抗肿瘤效果的结果。纵坐标表 示M0LM13细胞的数量，横坐标表示各种IL-3Ra抗体名称。
[0091] [图8]和[图9]图8和9是使用抗IL-3Ra抗体对表达IL-3Ra的细胞系进行 的ADCC试验的结果。在图8中使用了未用IL-2培养的PBMC，在图9中使用了用IL-2培养 的PBMC。
[0092] [图10]图10是通过抗IL-3Ra抗体和PE-标记的抗人类IgG第二抗体检测的表 达食蟹猴（Macacafascicularis)IL_3Ra的流式细胞术分析的结果。上排显示了表达食 蟹猴IL-3Rci的细胞，下排显示了表达人类IL-3Rci的细胞。
[0093] 实施本发明的方式
[0094] (特别理想的实施方案的详细描述）
[0095] 在本说明书中使用的分段标题仅仅是出于组织的目的，不应被解释为对所描述的 主题内容的限制。在本申请中引用的所有参考文献以任选目的在本说明书中明确引为参 考。
[0096](概要）
[0097] 本发明涉及针对人类IL-3Ra链的抗体，其不抑制IL-3信号传导并与人类 IL-3Ra链（在后文中称为IL-3Ra)的B结构域结合，但不与C结构域结合。
[0098] IL-3受体（在后文中称为IL-3R)、特别是IL-3Ra表达在白血病干细胞的细胞表 面上。一般来说，IL-3受体P链（在后文中称为IL-3RP)将IL-3信号传导传递到细胞 中，并因此诱导生长和分化。
[0099] 因此，存在着IL-3信号传导的抑制引起副作用、例如正常干细胞的正常造血功 能的抑制的可能性。因此，作为靶向白血病干细胞的新治疗方法，优选情况下该方法靶向 IL-3Ra，并且也不抑制IL-3信号传导。
[0100] (IL-3RQ)
[0101] 由IL-3RCI基因编码的蛋白是I型跨膜蛋白，其属于细胞因子受体家族。在正常 细胞中，IL-3Ra分子表达在一部分造血前体细胞、嗜碱性粒细胞、一部分树突状细胞等上。 在肿瘤的情况下，已知它在造血系统癌症和白血病中表达。作为表达IL-3Rci的肿瘤的实 例，已知IL-3Ra在急变期AML和CML的母细胞上，以及在AML、CML、MDS、ALL和SM中被认 为是白血病干细胞的分化标志物阴性⑶34阳性⑶38阴性级分的情形中表达。在血液中， IL-3Ra的已知配体IL-3表达在活化的T细胞、自然杀伤细胞、肥大细胞和一部分巨核细 胞上。此外，IL-3Ra也被称为⑶123。IL-3Ra包括哺乳动物（例如灵长类和人类）类型 的IL-3Ra。IL-3Ra序列包括多态性变体。全长人类IL-3Ra的具体实例包括下列氨基 酸序列。
【主权项】
1. 一种用于制备针对人类IL-3RCI链的抗体的方法，所述方法包括将人类IL-3RCI、其 子序列或其片段给药于能够表达人类免疫球蛋白的动物，筛选表达针对人类IL-3RCI链的 抗体的动物，选择产生针对人类IL-3Ra链的抗体的动物，以及从所选动物分离所述抗体， 其中所述抗体不抑制IL-3信号传导并与人类IL-3R a链的B结构域结合，但是不结合人类 IL-3R a链的C结构域，所述抗体包含选自下列（a)至（e)的重链⑶R和轻链⑶R的氨基酸 序列： (a) 重链的⑶R 1至3分别为SEQ ID NO: 113至115的氨基酸序列，轻链的⑶R 1至3 分别为SEQ ID NO: 131至133的氨基酸序列， (b) 重链的⑶R 1至3分别为SEQ ID NO: 116至118的氨基酸序列，轻链的⑶R 1至3 分别为SEQ ID NO: 134至136的氨基酸序列， (c) 重链的⑶R 1至3分别为SEQ ID NO: 119至121的氨基酸序列，轻链的⑶R 1至3 分别为SEQ ID NO: 137至139的氨基酸序列， ⑷重链的⑶R 1至3分别为SEQ ID NO: 122至124的氨基酸序列，轻链的⑶R 1至3 分别为SEQ ID NO: 140至142的氨基酸序列，以及 (e)重链的⑶R 1至3分别为SEQ ID NO: 125至127的氨基酸序列，轻链的⑶R 1至3 分别为SEQ ID NO: 143至145的氨基酸序列。
2. 权利要求1的方法，其中人类IL-3Ra、其子序列或其片段是与人类Fc重组蛋白偶 联的。
3. 权利要求1或2的方法，其中所述片段是IL-3
文档序号 :
【 8230504 】
技术研发人员：俵知纪,高柳晋一郎,稻垣好昌
技术所有人：协和发酵麒麟株式会社
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
声 明 ：此信息收集于网络，如果你是此专利的发明人不想本网站收录此信息请联系我们，我们会在第一时间删除
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