用于治疗血液肿瘤的抗IL-3Rα抗体的制作方法
4. 权利要求1或2的方法，其中所述动物包括灵长类、小鼠、大鼠、兔、山羊、绵羊、牛和 豚鼠。
5. 权利要求1或2的方法，其中所述动物包括经过遗传修饰以包含人类基因座的动物。
6. 权利要求1或2的方法，其中所述动物是转基因小鼠或转基因牛。
7. 权利要求1或2的方法，其中所述动物是染色体转移小鼠。
8. 权利要求1或2的方法，其中所述抗体进一步具有高抗体依赖性细胞毒性（ADCC)。
9. 权利要求8的方法，其中通过使用用IL-2培养的PBMC的Colon-26/hCD123 ADCC测 定法，高抗体依赖性细胞毒性（ADCC)在0.01 μ g/ml的抗体浓度下显示出10%的特异的裂 解率。
10. 权利要求1或2的方法，其中所述抗体包含选自下列（a)至（e)的重链可变区和轻 链可变区： (a) 包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列中从20位谷氨酰胺（Q)至139位丝氨酸⑶的 氨基酸序列的重链可变区，以及包含SEQ ID N0:55的氨基酸序列中从23位缬氨酸（V)至 129位赖氨酸（K)的氨基酸序列的轻链可变区； (b) 包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列中从20位谷氨酰胺（Q)至139位丝氨酸⑶的 氨基酸序列的重链可变区，以及包含SEQ ID N0:59的氨基酸序列中从23位缬氨酸（V)至 129位赖氨酸（K)的氨基酸序列的轻链可变区； (c) 包含SEQ ID N0:61的氨基酸序列中从20位谷氨酰胺（Q)至139位丝氨酸⑶的 氨基酸序列的重链可变区，以及包含SEQ ID N0:63的氨基酸序列中从23位天冬氨酸（D) 至129位赖氨酸（K)的氨基酸序列的轻链可变区； (d) 包含SEQ ID N0:65的氨基酸序列中从20位谷氨酰胺（Q)至139位丝氨酸⑶的 氨基酸序列的重链可变区，以及包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列中从23位天冬氨酸（D) 至129位赖氨酸（K)的氨基酸序列的轻链可变区； (e) 包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列中从20位谷氨酰胺（Q)至138位丝氨酸⑶的 氨基酸序列的重链可变区，以及包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列中从23位天冬氨酸（D) 至129位赖氨酸（K)的氨基酸序列的轻链可变区。
11. 一种用于制备针对人类IL-3Ra链的抗体的方法，所述方法包括将表达IL-3R a的 细胞、含有IL-3Ra的制备物或细胞提取液或级分、或者部分纯化的IL-3Ra给药于能够表 达人类免疫球蛋白的动物，筛选表达针对人类IL-3R a链的抗体的动物，选择产生针对人 类IL-3Ra链的抗体的动物，以及从所选动物分离所述抗体，其中所述抗体不抑制IL-3信 号传导并与人类IL-3R a链的B结构域结合，但是不结合人类IL-3R a链的C结构域，所述 抗体包含选自下列（a)至（e)的重链CDR和轻链CDR的氨基酸序列： (a) 重链的⑶R 1至3分别为SEQ ID NO: 113至115的氨基酸序列，轻链的⑶R 1至3 分别为SEQ ID NO: 131至133的氨基酸序列， (b) 重链的⑶R 1至3分别为SEQ ID NO: 116至118的氨基酸序列，轻链的⑶R 1至3 分别为SEQ ID NO: 134至136的氨基酸序列， (c) 重链的⑶R 1至3分别为SEQ ID NO: 119至121的氨基酸序列，轻链的⑶R 1至3 分别为SEQ ID NO: 137至139的氨基酸序列， ⑷重链的⑶R 1至3分别为SEQ ID NO: 122至124的氨基酸序列，轻链的⑶R 1至3 分别为SEQ ID NO: 140至142的氨基酸序列，以及 (e)重链的⑶R 1至3分别为SEQ ID NO: 125至127的氨基酸序列，轻链的⑶R 1至3 分别为SEQ ID NO: 143至145的氨基酸序列。
12. 权利要求1或11的方法，其中通过静脉内途径、腹膜内途径、肌肉内途径或皮下途 径对所述动物进行免疫。
13. -种用于生产针对人类IL-3Ra链的抗体的方法，所述方法包括以下步骤：将编码 所述抗体的氨基酸序列的核酸导入宿主细胞，在培养基中培养所述细胞，收集培养上清液， 以及从所述上清液纯化所述抗体，其中所述抗体包含选自下列（a)至（e)的重链互补决定 区（CDR)和轻链CDR的氨基酸序列 ： (a) 重链的⑶R 1至3分别为SEQ ID NO: 113至115的氨基酸序列，轻链的⑶R 1至3 分别为SEQ ID NO: 131至133的氨基酸序列， (b) 重链的⑶R 1至3分别为SEQ ID NO: 116至118的氨基酸序列，轻链的⑶R 1至3 分别为SEQ ID NO: 134至136的氨基酸序列， (c) 重链的⑶R 1至3分别为SEQ ID NO: 119至121的氨基酸序列，轻链的⑶R 1至3 分别为SEQ ID NO: 137至139的氨基酸序列， ⑷重链的⑶R 1至3分别为SEQ ID NO: 122至124的氨基酸序列，轻链的⑶R 1至3 分别为SEQ ID NO: 140至142的氨基酸序列，以及 (e)重链的⑶R 1至3分别为SEQ ID NO: 125至127的氨基酸序列，轻链的⑶R 1至3 分别为SEQ ID NO: 143至145的氨基酸序列。
14. 权利要求13的方法，其中所述抗体进一步具有高抗体依赖性细胞毒性（ADCC)。
15. 权利要求14的方法，其中通过使用用IL-2培养的PBMC的Colon-26/hCD123 ADCC 测定法，高抗体依赖性细胞毒性（ADCC)在0.01 μ g/ml的抗体浓度下显示出10%的特异的 裂解率。
16. 权利要求13的方法，其中所述抗体包含选自下列（a)至（e)的重链可变区和轻链 可变区： (a) 包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列中从20位谷氨酰胺（Q)至139位丝氨酸⑶的 氨基酸序列的重链可变区，以及包含SEQ ID N0:55的氨基酸序列中从23位缬氨酸（V)至 129位赖氨酸（K)的氨基酸序列的轻链可变区； (b) 包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列中从20位谷氨酰胺（Q)至139位丝氨酸⑶的 氨基酸序列的重链可变区，以及包含SEQ ID N0:59的氨基酸序列中从23位缬氨酸（V)至 129位赖氨酸（K)的氨基酸序列的轻链可变区； (c) 包含SEQ ID N0:61的氨基酸序列中从20位谷氨酰胺（Q)至139位丝氨酸⑶的 氨基酸序列的重链可变区，以及包含SEQ ID N0:63的氨基酸序列中从23位天冬氨酸（D) 至129位赖氨酸（K)的氨基酸序列的轻链可变区； (d) 包含SEQ ID N0:65的氨基酸序列中从20位谷氨酰胺（Q)至139位丝氨酸⑶的 氨基酸序列的重链可变区，以及包含SEQ ID N0:67的氨基酸序列中从23位天冬氨酸（D) 至129位赖氨酸（K)的氨基酸序列的轻链可变区； (e) 包含SEQ ID N0:69的氨基酸序列中从20位谷氨酰胺（Q)至138位丝氨酸⑶的 氨基酸序列的重链可变区，以及包含SEQ ID N0:71的氨基酸序列中从23位天冬氨酸（D) 至129位赖氨酸（K)的氨基酸序列的轻链可变区。
17. 权利要求13的方法，其中所述抗体具有人类免疫球蛋白的Fc区。
18. 权利要求13的方法，其中所述抗体是人类IgGl类抗体。
【专利摘要】本申请涉及用于治疗血液肿瘤的抗IL-3Rα抗体。具体而言，本申请提供了针对人类IL-3Rα链的抗体，其不抑制IL-3信号传导并与人类IL-3Rα链的B结构域结合，但是不结合人类IL-3Rα链的C结构域；用于预防或治疗血液肿瘤的组合物，在所述血液肿瘤中在对象的骨髓或外周血中发现了表达IL-3Rα的细胞，所述组合物的特征在于包含人类IL-3Rα抗体作为活性成分；以及用于治疗血液肿瘤的方法，在所述血液肿瘤中在骨髓或外周血中发现了表达IL-3Rα的细胞，所述方法的特征在于包含向对象给药包含人类IL-3Rα抗体作为活性成分的组合物。
【IPC分类】A61P35-00, C12N15-63, C07K16-28, A61K39-395
【公开号】CN104558179
【申请号】CN201410818341
【发明人】俵知纪, 高柳晋一郎, 稻垣好昌
【申请人】协和发酵麒麟株式会社
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2010年4月27日
【公告号】CA2764432A1, CN102459342A, CN102459342B, EP2426148A1, EP2426148A4, EP2426148B1, US8492119, US20120070448, US20130295107, WO2010126066A1
文档序号 :
【 8230504 】
技术研发人员：俵知纪,高柳晋一郎,稻垣好昌
技术所有人：协和发酵麒麟株式会社
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
声 明 ：此信息收集于网络，如果你是此专利的发明人不想本网站收录此信息请联系我们，我们会在第一时间删除
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