一种猴头菇多糖的提取方法
技术领域：
本发明涉及一种猴头菇多糖的提取方法。
(二)
背景技术：
猴头菇(Hericiumerinaceus)又名猴头、猴头蘑、猴头菌、刺猬菌等， 是一种大型真菌，属担子菌纲、多孑L菌目、齿菌科、猴头属，因其子实体 形状像猴子头部而得名。从猴头菇子实体中提取到的多糖是主链由(3-1,3 糖苷键，支链为p-l,6糖苷键连接的葡聚糖混合物，分子量在8000~40000 之间。大量的医学和药理学研究表明，该猴头菇多糖具有提高免疫力、抗 肿瘤、抗衰老、降血脂等生理功能，对消化系统的癌变、溃疡、胃窦炎、 慢性胃炎等病均有疗效，并且能提高人体的免疫能力。因此，猴头多糖制 成的药物和保健品深受人们喜爱，开发前景广阔。
目前常用的猴头菇多糖的提取方法有碱提法、酸提法、盐提法还有热 水浸提法。稀酸、稀碱法，试剂用量少，仪器均为常规仪器，因此操作简 单易行。但稀酸、稀碱条件下，易使多糖发生糖苷键的断裂，部分多糖发 生水解而使多糖的提取率减少，而且杂质含量也比较多，有一定的适用范 围。刘桢鎏发明专利"真菌多糖精化提纯工艺"指出了提纯真菌多糖方法 (200610012682.3 )，但针对猴头菇多糖而言，其本身存在使颜色较深的 酚型化合物与糖链连接，较难除去，且还存在纤维素、果胶等生物大分子 的干扰，超滤膜孔易阻塞等问题。因此，由此法获得的猴头菇多糖还存在 产品色泽、效率、纯度等需要进一步提高的缺陷。
(三)
发明内容
本发明目的是优化和完善猴头菇多糖的提^^工艺，提供一种产品收率 高、纯度好的猴头菇多糖提取方法。
本发明采用的技术方案是 一种猴头菇多糖的提取方法，所述方法包括
(1) 取干燥猴头菇(可由新鲜猴头菇经自然风干得到)，粉碎，过 50~120目筛，得猴头菇干燥粉末；
(2) 猴头菇干燥粉末加入5 35倍质量的蒸馏水，50 8(TC下用 8 20KHz超声波萃取0.5h 2.0h,过滤，取滤液1;滤渣可重复 进行超声波萃取操作，滤液合并后进行下一步提取；
(3) 调节滤液lpH为3 6,加入足量纤维素酶，30 60。C水解 1.0h 4.0h,离心取滤液2调pH为3 6，加入足量果胶酶，30~60°C 水解0.5h 1.5h，离心取滤液3调pH为3~6,加入足量木瓜蛋白 酶，30 60。C水解1.0h 2.0h,离心，耳又滤液4;
(4) 调节滤液4 pH为8~9,加入体积为滤液4体积0.5~1.0倍的 20~40%双氧水，于30 50。C保温搅拌0.5h lh,超滤膜超滤，收 集分子量10000道尔顿以上的组分，冷冻干燥，得到猴头菇多 糖。
所述纤维素酶可采用市购商品酶，用量以足量为宜，优选的，酶活性 为10000 20000u/g的纤维素酶质量用量为滤液1质量的0.5~1.0倍。
所述果胶酶可采用市购商品酶，用量以足量为宜，优选的，酶活性为 15000 25000 u/g的果胶酶质量用量为滤液2质量的1.0-1.5倍。
所述木瓜蛋白酶可采用市购商品酶，用量以足量为宜，酶活性为 800000-1000000 u/g的木瓜蛋白酶质量用量为滤液3质量的0.5-1.5倍。
具体的，所述方法如下
(1) 取干燥猴头菇，充分粉碎，过50 120目筛，得猴头菇干燥粉末；
(2) 猴头菇干燥粉末加入10-25倍质量的蒸馏水，50 60。C下用 10 15KHz超声波萃取0.5h 2.0h，过滤，取滤液1-1,滤渣加入10~25 倍质量的蒸馏水，50-60°C下用10 15KHz超声波萃取0.5h 2.0h， 过滤，耳又滤液1-2,合并滤液1-1和滤液1-2,得滤液l;
(3 )调节滤液1的pH为3.5~4.0,加入质量为滤液1质量0.6~0.9倍的 15000u/g的纤维素酶，40 45。C水解1.0h 2.0h,离心取滤液2调pH 为4.0 4.5,加入质量为滤液2质量1.0 1.2倍的20000u/g的果胶酶， 45 50。C水解1.0h 1.5h,离心取滤液3调pH为4.0 4.5,加入质量 为滤液3质量0.8 1.2倍的800000u/g的木瓜蛋白酶，45 5(TC水解 1.2h 1.5h,离心，耳又滤液4;
(4 )调节滤液4 pH为8~9,加入体积为滤液4体积0.5 1.0倍的30%双 氧水，于40 45。C保温搅拌0.5h lh，以5k的聚石风膜超滤，收集分
子量10000道尔顿以上的组分，冷冻干燥，得到猴头菇多糖。 本发明的有益效果主要体现在1、所制得产品纯度高，其中(3-葡聚 糖含量可高达40%以上，生物活性高；2、针对猴头菇子实体本身含有纤 维素、果胶、蛋白质等杂质的干扰，筛选适用于此的纤维素酶、果胶酶、 木瓜蛋白酶反应体系，使杂质充分脱除，猴头菇粗多糖得率可达12.2%, 比传统的热水浸提法粗多糖提取得率提高了近67.4%; 3、采用双氧水脱 色，条件温和，不易损坏多糖结构，且副产物为水，绿色环保，符合保健 食品的生产要求；4、采用聚砜膜，将切向流过滤技术应用到猴头菇多糖 的制备中，在过滤的同时也对聚砜膜表面冲刷，使膜表面不会形成杂质大 分子凝胶层，从而确保稳定、快速的超滤速度，大大缩短工艺时间，便于 工业化生产。 具体实施例方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围
并不仅限于此 实施例1:
a. 对猴头菇子实体预处理，取新鲜的猴头菇，将其自然风干，充分 粉碎后，过60目筛。
b. 将过筛后的原料加10倍质量的蒸馏水，搅拌均匀并逐渐升温， 在6(TC范围内用10KHz的超声波对其进行1.5h的超声波萃取，过 滤，滤渣重复上述步骤，再萃取一次，合并滤液。
c. 调节滤液pH4.0，先加入0.8倍质量的纤维素酶(酶活15000U/g, 无锡市雪梅酶制剂科技有限公司，下同)，控制温度在40°C，水 解1.5h,冷冻离心，弃去残渣；再调节滤液pH4.0,往滤液中继续 加入1.0倍质量的果胶酶(酶活20000 U/g，天津市利华酶制剂厂， 下同)，控制温度在45°C,水解l.Oh，冷冻离心，弃去残渣；最 后再调节滤液pH4.0，加入0.8倍质量的木瓜蛋白酶(酶活800000 U/g,无锡市雪梅酶制剂科技有限公司，下同)，控制温度在50。C, 7jc解l.5h,冷冻离心，收集滤液。
d. 调节pH为8,然后逐渐加入0.6倍体积的30%双氧水，搅拌， 控制滤液温度在40 °C,保温3Omin至颜色变浅。
e. 采用切向流超滤技术，使用超滤膜进行超滤，使用5k的聚砜膜(北 京特里高膜技术有限公司，下同)，压力不超过0.4MPa，滤液被分
为两部分，收集10000道尔顿以上的部分。 f.对操作步骤e获得的滤液进行冷冻干燥，即获得所需的猴头菇多 糖，经自动称量后进行密封防潮包装(软包装、瓶装)，最后装箱 入库。 多糖含量的4全测
精确称取猴头菇多糖10mg置于100ml烧杯中，力。80ml重蒸水煮沸 1小时后冷却至室温，再加重蒸水定容量至100ml。量取l.Oml移入比色 皿中，加5.0%重蒸苯酚2.0ml,再加浓」琉酸5.0ml,摇匀后室温力文置20min, 在波长490nm处测定吸光度。
制备的猴头菇多糖为淡黄色粉末，易吸湿，易溶于水，含量为43%, 且符合下述指标
1. 重金属指标Pb〈1.5ppm As〈1.0ppm Hg〈0.3ppm。
2. 卫生指标细菌数〈1000个/g大肠杆菌、活螨不得检出，霉菌数 〈35个/g。
实施例2:
a. 对猴头菇子实体预处理，取新鲜的猴头菇，将其自然风干，充 分粉碎后，过100目筛。
b. 将过筛后的原料加20倍质量的蒸馏水，搅拌均匀并逐渐升温， 在50。C范围内用15KHz的超声波对其进行0.8h的超声波萃取， 过滤，滤渣重复上述步骤，再萃:f又一次，合并滤液。
c. 调节滤液pH4.0,先加入0.6倍质量的纤维素酶，控制温度在 45°C,水解1.0h,冷冻离心，弃去残渣；再调节滤液pH4.5,往 滤液中继续加入1.0倍质量的果胶酶，控制温度在50°C，水解
l.Oh,冷冻离心，弃去残渣；最后再调节滤液pH4.5,加入1.2 倍质量的木瓜蛋白酶，控制温度在45。C，水解1.2h,冷冻离心， 收集滤液。
d. 调节pH为8,然后逐渐加入1.0倍体积的30%双氧水，搅拌， 控制滤液温度在45°C,保温30min至颜色变浅。
e. 采用切向流超滤技术，使用超滤膜进行超滤，尤其使用5k的 聚砜膜，压力不超过0.4MPa,滤液被分为两部分，收集10000 道尔顿以上的部分。
f. 对操作步骤e获得的滤液进行冷冻干燥，即获得所需的猴头菇 多糖，经自动称量后进行密封防潮包装(软包装、瓶装)，最后装 箱入库。
多糖含量的检测
精确称取猴头菇多糖10mg置于100ml烧杯中，力。80ml重蒸水煮沸 1小时后冷却至室温，再加重蒸水定容量至100ml。量取1.0ml移入比色 亚中，加5.0%重蒸苯酚2.0ml,再加浓碌L酸5.0ml,摇匀后室温;^文置20min, 在波长490nm处测定吸光度。
制备的猴头菇多糖为淡黄色粉末，易吸湿，易溶于水，含量为45%, 且符合下述指标
1. 重金属指标:Pb〈1.5ppm As〈1.0ppm Hg〈0.3ppm。
2. 卫生指标细菌数<1000个/g大肠杆菌、活螨不得检出，霉菌数 〈35个/g。
实施例3:
a.对猴头菇子实体预处理，取新鲜的猴头菇，将其自然风干，充分
粉碎后，过80目筛。
b. 将过筛后的原料加25倍质量的蒸馏水，搅拌均匀并逐渐升温， 在60。C范围内用15KHz的超声波对其进行0.8h的超声波萃取，过 滤，滤渣重复上述步骤，再萃耳又一次，合并滤液。
c. 调节滤液pH3.5,先加入0.9倍质量的纤维素酶,控制温度在45。C ， 水解2.0h，冷冻离心，弃去残渣；再调节滤液pH4.5,往滤液中继 续加入1.2倍质量的果胶酶，控制温度在45。C,水解1.0h,冷冻离 心，弃去残渣；最后再调节滤液pH4.0,加入1.0倍质量的木瓜蛋 白酶，控制温度在45。C,水解1.5h,冷冻离心，收集滤液。
d. 调节pH为8，然后逐渐加入0.8倍体积的30%双氧水，搅拌，控 制滤液温度在45 。C,保温30min至颜色变浅。
e. 釆用切向流超滤技术，使用超滤膜进行超滤，尤其使用5k的聚砜 膜，压力不超过0.4MPa，滤液被分为两部分，收集10000道尔顿以 上的部分。
f. 对操作步骤e获得的滤液进行冷冻干燥，即获得所需的猴头菇多 糖，经自动称量后进行密封防潮包装(软包装、瓶装)，最后装箱 入库。
多糖含量的检测
精确称取猴头菇多糖10mg置于100ml烧杯中，加80ml重蒸水煮沸 1小时后冷却至室温，再加重蒸水定容量至100ml。量取1.0ml移入比色 皿中，加5.0%重蒸苯酚2.0ml，再加浓碌u酸5.0ml,摇匀后室温》文置20min， 在波长490nm处测定吸光度。
制备的猴头菇多糖为淡黄色粉末，易吸湿，易溶于水，含量为47%, 且符合下述指标
1. 重金属指标Pb〈1.5ppm As〈1.0ppm Hg〈0.3ppm。
2. 卫生指标细菌数< 1000个/g大肠杆菌、活螨不得;险出，霉菌数 00个/g。
权利要求
1.一种猴头菇多糖的提取方法，所述方法包括(1)取干燥猴头菇，粉碎，过50～120目筛，得猴头菇干燥粉末；(2)猴头菇干燥粉末加入5～35倍质量的蒸馏水，50～80℃下用8～20KHz超声波萃取0.5h～2.0h，过滤，取滤液1；(3)调节滤液1pH为3～6，加入足量纤维素酶，30～60℃水解1.0h～4.0h，离心取滤液2调pH为3～6，加入足量果胶酶，30～60℃水解0.5h～1.5h，离心取滤液3调pH为3～6，加入足量木瓜蛋白酶，30～60℃水解1.0h～2.0h，离心，取滤液4；(4)调节滤液4pH为8～9，加入体积为滤液4体积0.5～1.0倍的20～40％双氧水，于30～50℃保温搅拌0.5h～1h，超滤膜超滤，收集分子量10000道尔顿以上的组分，冷冻干燥，得到猴头菇多糖。
2. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所述纤维素酶酶活性为 10000~20000 u/g,所述纤维素酶质量用量为滤液1质量的0.5-1.0倍。
3. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所述果胶酶酶活性为 15000~25000u/g，所述果胶酶质量用量为滤液2质量的1.0~1.5倍。
4. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所述木瓜蛋白酶酶活性为 800000 1000000u/g,所述果胶酶质量用量为滤液3质量的0.5~1.5倍。
5. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(2)的提取是为2次 重复提取猴头菇干燥粉末加入5~35倍质量的蒸馏水，50 80。C下用 8 20KHz超声波萃取0.5h 2.0h，过滤，取滤液1-1,滤渣继续用5~35 倍质量的蒸馏水于50 80'C下用8 20KHz超声波重复提取，过滤，取 滤液1-2,合并滤液1-1与滤液1-2为滤液1。 6.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述方法如下(1) 取干燥猴头菇，粉碎，过50 120目筛，得猴头菇干燥粉末；(2) 猴头菇干燥粉末加入10 25倍质量的蒸馏水，50 60。C下用 10 15KHz超声波萃取0.5h 2.0h,过滤，取滤液1-1,滤渣加入 10 25倍质量的蒸馏水，50 60。C下用10 15KHz超声波萃取 0.5h 2.0h，过滤，耳又滤液1-2,合并滤液1-1和滤液1-2,得滤液(3 )调节滤液1的pH为3.5~4.0，加入质量为滤液1质量0.6 0.9倍 的酶活性为15000u/g的纤维素酶，40 45。C水解1.0h 2.0h，离心 取滤液2调pH为4.0 4.5，加入质量为滤液2质量1.0~1.2倍的 酶活性为20000u/g的果胶酶，45 5(TC水解1.0h 1.5h，离心取滤 液3调pH为4.0 4.5,加入质量为滤液3质量0.8~1.2倍的酶活 性为800000u/g的木瓜蛋白酶，45 50。C水解1.2h 1.5h,离心， 耳又滤液4;(4 )调节滤液4 pH为8 9，加入体积为滤液4体积0.5~1.0倍的30% 双氧水，于40 45。C保温搅拌0.5h lh,以5k的聚砜膜超滤，收 集分子量10000道尔顿以上的组分，冷冻干燥，得到猴头菇多糖。
全文摘要
本发明提供了一种产品收率高、纯度好的猴头菇多糖提取方法。所述方法包括猴头菇干燥粉末加入水，50～80℃下用8～20KHz超声波萃取0.5h～2.0h，过滤，滤液依次用足量纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶水解，最后加入双氧水，于30～50℃保温搅拌0.5h～1h，超滤膜超滤，收集分子量10000道尔顿以上的组分，冷冻干燥，得到猴头菇多糖。本发明的有益效果主要体现在1.所制得产品纯度高，其中β-葡聚糖含量可高达40％以上，生物活性高，猴头菇粗多糖得率可达12.2％；2.采用双氧水脱色，条件温和，不易损坏多糖结构，且副产物为水，绿色环保，符合保健食品的生产要求。
文档编号C12P19/14GK101358224SQ200810120448
公开日2009年2月4日 申请日期2008年9月4日 优先权日2008年9月4日
发明者付立忠, 吴学谦, 吴庆其, 李海波, 程俊文, 亮 贺, 魏海龙 申请人:浙江益圣菌物发展有限公司
文档序号 :
【 598456 】
技术研发人员：贺亮,吴学谦,程俊文,吴庆其,付立忠,李海波,魏海龙
技术所有人：浙江益圣菌物发展有限公司
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
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技术研发人员：贺亮,吴学谦,程俊文,吴庆其,付立忠,李海波,魏海龙
技术所有人：浙江益圣菌物发展有限公司
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
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