内包核酸的高分子微囊复合体及其制造方法
[0066] 予以说明，在本申请说明书中，"Cx-y"是指碳数X~y。
[0067] 在内包核酸的高分子微囊复合体中，从高分子微囊复合体的稳定性的方面出发， 优选使构成其的嵌段共聚物彼此交联。例如，通过在阳离子性高分子链嵌段的侧链或其末 端(与以共价键直接或间接结合于非电荷性亲水性高分子链嵌段的末端相反一侧的末端） 具有硫醇基（一 SH基）、与交联剂的结合部位，从而可以使所得内包核酸的高分子微囊复合 体更稳定化。也可以通过使阳离子性高分子链嵌段中的硫醇基彼此以二硫键结合(SS结合） 来进行交联。
[0068]作为与交联剂的结合部位，可列举氨基（一 NH2基）、硫醇基、羟基、羧基等。作为可 以将这些基团作为结合部位的交联剂，可以使用：在分子内具有多个醛基的戊二醛、丁二 醛、多聚甲醛(paraf ormaldehyde)、邻苯二甲醛(酞醛)等;在分子内具有马来酰亚胺基和活 性酯基的N - [α-马来酰亚胺乙酰氧基]琥珀酰亚胺酯、N - [β -马来酰亚胺丙氧基]琥珀酰 亚胺酯、N- [ε-马来酰亚胺己酰氧基]琥珀酰亚胺酯、N- [ γ -马来酰亚胺丁酰氧基]琥珀 酰亚胺酯、琥珀酰亚胺基一4一 [Ν-马来酰亚胺甲基]环己烷一 1 一羧基一 [6-酰胺己酸 酯]、间马来酰亚胺苯甲酰基一N-羟基琥珀酰亚胺酯、琥珀酰亚胺基一4一[Ν-马来酰亚胺 甲基]环己烷一 1 一甲酸酯、琥珀酰亚胺基一4一 [ρ-马来酰亚胺苯基]丁酸酯、琥珀酰亚胺 基一6- [(β-马来酰亚胺丙酰胺）己酸酯]等；在分子内具有活性酯和硝基苯基叠氮基的 N- 5-叠氮基一2-硝基苯甲酰氧基琥珀酰亚胺、N-琥珀酰亚胺基一6 - [4'一叠氮基一 2' 一硝基苯基氨基]己酸酯等;在分子内具有苯基叠氮基和苯基乙二醛(glyoxal)基的对叠 氮基苯基乙二醛等;在分子内具有多个马来酰亚胺基的1，4一双马来酰亚胺丁烷、双马来酰 亚胺乙烷、双马来酰亚胺己烷、1，4一双马来酰亚胺基一2,3-二氢丁烷、1，8-双马来酰亚 胺三乙二醇、1，11一双马来酰亚胺四乙二醇、双[2 -（琥珀酰亚胺基氧基羰氧基）乙基]砜、 三[2-马来酰亚胺乙基]胺等;在分子内具有多个磺基活性酯基的双[磺基琥珀酰亚胺基] 辛二酸酯、双[2 -（磺基琥珀酰亚胺氧基羰氧基）乙基]砜、二磺基琥珀酰亚胺基酒石酸酯、 乙二醇双[磺基琥珀酰亚胺基琥珀酸酯]、三磺基琥珀酰基（succinidyl)氨基三乙酸酯等； 在分子内具有多个烯丙基卤基的1，5 -二氟一 2,4 一二硝基苯等;在分子内具有多个酰亚胺 酯基的己二亚胺酸二甲酯（dimethyl adipimidate)、庚二亚胺酸二甲酯（dimethyl pimelimidate)、辛二亚胺酸二甲酯（dimethyl suberimidate)等；在分子内具有多个吡啶 二硫基的1，4一二一 [3'一（2'一吡啶二硫基)丙酰胺]丁烷等;在分子内具有多个活性酯基 的二琥珀酰亚胺基戊二酸酯、二琥珀酰亚胺基辛二酸酯、二琥珀酰亚胺基酒石酸酯、乙二醇 双[琥珀酰亚胺基琥珀酸酯]等;在分子内具有多个乙烯基磺酸基的1，6-己烷一双乙烯基 砜等;在分子内具有吡啶二硫基和活性酯基的琥珀酰亚胺基一 6 - [ 3 -（ 2 -吡啶二硫基)丙 酰胺]己酸酯、4 一琥珀酰亚胺基氧基羰基一甲基一 α - [2 -吡啶二硫基]甲苯、N-琥珀酰亚 胺基一 3 - [2 -吡啶二硫基]丙酸酯等;在分子内具有羟基苯基叠氮基和活性酯基的N-羟 基琥珀酰亚胺基一 4 一叠氮基水杨酸等；在分子内具有马来酰亚胺基和异氰酸酯基的N - [对马来酰亚胺苯基]异氰酸酯等;在分子内具有马来酰亚胺基和磺基活性酯基的N - [ε - 马来酰亚胺己酰氧基]磺基琥珀酰亚胺酯、N- [ γ -马来酰亚胺丁酰氧基]磺基琥珀酰亚胺 酯、N-羟基磺基琥珀酰亚胺基一 4 一叠氮基苯甲酸酯、N - [κ 一马来酰亚胺十一酰氧基]磺 基琥珀酰亚胺酯、间马来酰亚胺苯甲酰基一 N-羟基磺基琥珀酰亚胺酯、磺基琥珀酰亚胺 基一4一 [Ν-马来酰亚胺甲基]环己烷一 1 一甲酸酯、磺基琥珀酰亚胺基一4一 [对马来酰亚 胺苯基]丁酸酯等；在分子内具有吡啶二硫基和磺基活性酯基的磺基琥珀酰亚胺基一 6 - [3'一（2-吡啶二硫基）丙酰胺]己酸酯、磺基琥珀酰亚胺基一6 - [α-甲基一α -（2-吡啶 二硫基）甲苯酰胺]己酸酯等;在分子内具有羟基苯基叠氮基和磺基活性酯基的磺基琥珀酰 亚胺基[4 一叠氮基水杨酰胺]己酸酯等;在分子内具有硝基苯基叠氮基和磺基活性酯基的 磺基琥珀酰亚胺基一6 - [4'一叠氮基一2'一硝基苯基氨基]己酸酯等;在分子内具有乙烯 基磺酸基和活性酯基的N-琥珀酰亚胺基一 [4 一乙烯基磺酰基]苯甲酸酯等。特别优选使用 戊二醛。
[0069] <嵌段共聚物>
[0070]本发明中所使用的嵌段共聚物为上述非电荷性亲水性高分子链嵌段的末端与上 述阳离子性高分子链嵌段的末端以共价键直接或间接(即，借助适当的连接子)结合而成的 嵌段共聚物。
[0071] 作为本发明中所使用的嵌段共聚物，优选上述非电荷性亲水性高分子链嵌段来自 聚乙二醇、且上述阳离子性高分子链嵌段来自聚氨基酸或其衍生物的嵌段共聚物，更优选 上述非电荷性亲水性高分子链嵌段来自聚乙二醇、且上述阳离子性高分子链嵌段来自选自 聚赖氨酸、聚鸟氨酸、聚精氨酸、聚高精氨酸、聚组氨酸、聚天冬氨酸及聚谷氨酸中的聚氨基 酸(包括来自聚氨基酸衍生物。）的嵌段共聚物。
[0072] 作为本发明中所使用的嵌段共聚物，具体而言，可例示出下述通式(I)或（II)所示 的嵌段共聚物。予以说明，下述通式（I)及(II)中的各重复单元为了便于记载而以特定的顺 序来表示，但是各重复单元也可以以无规的顺序存在。
[0075][通式（I)及（II)中，R1^SRlb*别独立地表示氢原子、或者未取代或取代的直链或 支链的C^12烷基，L1及L2表示连结基，R2^SR 2b分别独立地表示亚甲基或亚乙基，R3表示氢原 子、保护基、硫醇基、疏水性基或聚合性基，R 4表示羟基、羟苄基、一NH - (CH2) a-X基(其中，a 为1~5的整数，X分别独立地为包含伯胺、仲胺、叔胺或季铵盐中的一种或二种以上的胺化 合物残基，或者非胺化合物的残基）、硫醇基、疏水性基、或者引发剂残基，R 5a、R5b、R5°及R5d分 别独立地表示羟基、羟苄基或NH-(CH2)a-X基，在心与1?5|3的总数及R 5。与1?5(1的总数中，一 NH-(CH2)a -X基（其中，X为(NH(CH2)2)e-NH2，e为1~5的整数)至少存在2个以上，R 6IR6b 分别独立地为氢原子、保护基(其中，保护基为通常作为氨基的保护基所使用的Z基、Boc基、 乙酰基或三氟乙酰基）或L3 - SH(L3为选自Cno亚烷基、C^6烷基一苯基、C^6烷基一亚苯 基一&- 6烷基、亚苯基及羰基一烷基的连结基。），m为5~20,000的整数，η为2~5,000的 整数，y为0~5,000的整数，2为1~5,000的整数， 7+2不大于11，另外，通式（1)及（11)中的各 重复单元为了便于记载而以特定的顺序来表示，但是各重复单元可以以无规的顺序存在。]
[0076] 在此，通式（I)及（II)的结构式中，重复单元数（聚合度）为"m"的嵌段是PEG嵌段 (非电荷性亲水性高分子链嵌段），将重复单元数为"11一 7 - 2"的部分、重复单元数为"y"的 部分和重复单元数为"z"的部分合在一起嵌段是阳离子性高分子链嵌段。
[0077] 上述通式（I)及（II)中，R1^SRlb*别独立地表示氢原子、或者未取代或取代的直 链或支链的Ch 2烷基。作为直链或支链的Ch2烷基，例如可列举甲基、乙基、正丙基、异丙 基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基、癸基、十一烷基等。另外，作为取代时的取代 基，可列举缩醛化甲酰基、氰基、甲酰基、羧基、氨基、&一 6烷氧基羰基、C2-7酰基酰胺基、相同 或不同的三Ci-6烷基硅氧基、硅氧基或甲硅烷基氨基。在此，缩醛化是指由甲酰基的羰基与 例如2分子的碳数1~6个的烷醇或与碳原子数2~6个的可以具有支链的亚烷基二醇的反应 所致的缩醛部的形成，也为该羰基的保护方法。例如，在取代基为缩醛化甲酰基时，可以在 酸性的温和条件下水解而转化为其他取代基即甲酰基（一CHO:或醛基）。
[0078] 另外，在根据需要使用具有氨基等反应性高的取代基的基团作为R1^SRlb的情况 下，可以通过该取代或根据需要进一步引入具有活性酯基、马来酰亚胺基的结合基后使靶 标指向性分子结合。作为靶标指向性分子，例如可列举前述的物质。
[0079]上述通式⑴及（I I)中，L1及L2表示连结基。具体而言，L1优选为一（CH2 )b-NH-（其 中，b为0~5的整数。），L2优选为一（CH2)c-CO-(其中，c为1~5的整数。）。予以说明，在b为0 的情况下，"_(CH 2)b-"表示单键。
[0080] 上述通式（I)及（I I)中，R2a、R2b、R2。及1?2(1分别独立地表示亚甲基或亚乙基。在心及 R2b的任一者为亚甲基的情况下，相当于聚(天冬氨酸衍生物），在为亚乙基的情况下，相当于 聚(谷氨酸衍生物），另外，在R 2e及R2d的任一者为亚甲基的情况下，相当于聚(天冬氨酸衍生 物），在为亚乙基的情况下，相当于聚(谷氨酸衍生物）。在这些通式中，在R 2^SR2b(R21ISR2a) 表示亚甲基及亚乙基这两者的情况以及R 2c^R2d(R2tlSR2e)表示亚甲基及亚乙基这两者的情 况下，天冬氨酸衍生物及谷氨酸衍生物的重复单元分别形成嵌段而存在、或者无规地存在。 [0081 ]上述通式（I)及（I I)中，R3表示氢原子、保护基、硫醇基、疏水性基或聚合性基。具 体而言，R3优选为乙酰基、丙烯酰基、甲基丙烯酰基、硫醇基或疏水性基。疏水性基具体为借 助连结基B 1M1为单键、一0)0-、一0)-、一0)-（012)11-0)-（其中，11为1~5的整数。）或下 述式（III)〕结合的上述的固醇衍生物的残基或C 4-24烃基。作为R3中的疏水性基，优选借助 连结基B1结合的固醇衍生物的残基，更优选胆固醇、胆留烷醇或二羟基胆固醇的3位羟基的 氢原子被除去后的基团借助连结基B 1结合的基团，进一步优选胆固醇3位羟基的氢原子被 除去后的基团借助连结基B1结合的基团。
[0082]【化2】
[0084] 上述通式（I)及（II)中，R4表示羟基、羟苄基、一NH- (CH2)a -X基、硫醇基、疏水性 基、或引发剂残基。其中，优选:a为1~5的整数，X为包含伯胺、仲胺、叔胺或季铵盐中的1种 或2种以上的胺化合物残基、或者非胺化合物的残基。进而，根据情况还优选使R 4为一 NH-R9 (其中，R9表示未取代或取代的直链或支链的C1-So烷基。）。疏水性基具体为上述的固醇衍生 物的残基或C4-24烃基。作为R 4中的疏水性基，优选固醇衍生物的残基，更优选胆固醇、胆甾 烷醇、二羟基胆固醇的3位羟基的氢原子被除去后的基团，进一步优选胆固醇3位羟基的氢 原子被除去后的基团。
[0085] 上述通式（I)及（II)中，R5a、R5b、R 5。及R5%、别独立地表示羟基、羟苄基、一NH - (CH2)a-X基。其中，优选:a为1~5的整数，X为包含伯胺、仲胺、叔胺或季铵盐中的1种或2种 以上的胺化合物残基、或者非胺化合物的残基。
[0086] 在心与心的总数及心与1?5(1的总数中，一NH-(CH2) a-X基〔其中，X为NH-(CH2)e-NH2(其中，e为1~5的整数）。〕优选存在至少2个以上，更优选存在上述总数的50%以上，进 一步优选存在上述总数的85%以上。另外，1?'1? 5|1?5。及1?5(1的全部或一部分优选为一冊一 (CH 2)a-NH-(CH2)e-NH2o
[0087] 进而，作为R4以及R5a、R5b、R5c及R 5d的例示，特别优选上述的一NH-(CH2)a-X基中X 为选自下述15个式子所示的基团的情况。
[0090] 其中，在上述的各式中，X2表示氢原子、或者&一6烷基或氨基&一6烷基，R'R 7lR7c: 分别独立地表示氢原子或甲基，dl、d2及d3分别独立地表示1~5的整数，el、e2及e3分别独 立地表示1~5的整数，f表示0~15的整数，g表示0~15的整数，R 8^SR8b分别独立地表示氢 原子、保护基、或L3 - SH( L3为选自Cno亚烷基、C^6烷基一苯基、&-6烷基一亚苯基一C 1-S烷 基、亚苯基及羰基一 C1-So烷基的连结基。）。其中，该保护基优选为选自通常作为氨基的保护 基所使用的Z基、Boc基、乙酰基及三氟乙酰基的基团。予以说明，在f及g为0的情况下，分别 是指单键。
[0091] 上述通式⑴及（II)中，1^及俨分别独立地为氢原子、保护基、或L3 - SH(L3为选自 &一20亚烷基、Ci-6烷基一苯基、Ci-6烷基一亚苯基一 Ci-6烷基、亚苯基及羰基一 Ci-20烷基的连 结基。）。其中，保护基优选为选自通常作为氨基的保护基所使用的Z基、Boc基、乙酰基及三 氟乙酰基的基团。
[0092] 上述通式（I)及（II)中，m为5~20000的整数。另外，η为2~5000的整数，y为0~ 5000的整数，z为1~5000的整数。但是，y与z的总和(y+z)不大于η。
[0093] 上述通式（I)及(II)所示的嵌段共聚物的制造方法并无限定，例如可列举:预先合 成包含Rla0 -或Rlb0-与PEG链的PEG嵌段，并在该PEG嵌段的单个末端（与Rla0-或R lb0 -相 反的末端)依次聚合规定的单体，之后根据需要对侧链以包含阳离子性基的方式进行置换 或变换的方法;或者，预先分别合成上述PEG嵌段和阳离子性高分子链嵌段(将重复单元数 为"1!一 7 - 2"的部分、重复单元数为"y"的部分和重复单元数为"z"的部分合在一起后的嵌 段），并将这
文档序号 :
【 9692029 】
技术研发人员：片冈一则,长田健介,赛奥弗里斯·阿格里斯·由佳利
技术所有人：国立研究开发法人科学技术振兴机构
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
声 明 ：此信息收集于网络，如果你是此专利的发明人不想本网站收录此信息请联系我们，我们会在第一时间删除
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